Name: 导尿在反刍动物的肠袢 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 17 min 15 s
Description: 了解绵羊回肠肠袢的新型手术置管技术，用于术后多次给药并长期监测肠道免疫变化。该方法为研究肠道生理学和免疫学提供了更灵活的实验模型。

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本研究的完成离不开加拿大阿尔伯塔省莱斯布里奇市加拿大农业与农业食品研究中心众多人员的奉献与努力。在此，我们感谢：Tara Shelton 在动物术前与术后护理、手术准备、麻醉学、样品分析以及视频成像方面的协助；Randy Wilde 和 Estela Costa 在术前与术后护理方面的贡献；Jenny Gusse 在样品分析方面的帮助；Byron Lee 提供的套管针图像；以及 Brian Egland 在绵羊饲养管理方面的支持。我们还感谢莱斯布里奇大学生物科学系的 Brent Selinger 提供视频设备与技术建议，以及其他协助（即执行制片），同时感谢莱斯布里奇大学课程再开发中心在视频拍摄方面的专业支持。本研究部分得到了先进食品与材料网络（G.D.I.）、加拿大—阿尔伯塔牛肉产业发展基金（G.D.I.）以及加拿大农业与农业食品部（G.D.I. 和 J.P.K.）资助项目的资助。

实验步骤：
<ol>
<li>所有器械均经高压灭菌；不可高压灭菌的材料须在Germex冷消毒液中灭菌，时间不少于10 min。</li>
<li>绵羊通过肌内注射给予乙酰丙嗪（0.05 mg/kg）、格隆溴铵（0.005 mg/kg）和酒石酸布托啡诺（0.2 mg/kg）进行术前用药，之后静置15-20分钟。</li>
<li>颈部剃毛并进行外科刷洗。一旦可视化颈静脉，即在静脉上方皮下注射0.1 ml利多卡因，将导管插入静脉，并使用牲畜识别标签胶和2英寸医用胶带固定于皮肤。术中通过重力滴注给予动物Plasmalyte 148，剂量为10 ml/kg/hr。 </li>
<li>地西泮（0.2 mg/kg）静脉注射，硫喷妥钠（10 mg/kg）诱导麻醉。利多卡因气管内喷雾用于声带，对绵羊进行气管插管，并以异氟烷（1.5–2.5% 溶于100% O₂）维持麻醉。2 以4 L/min的流速持续通氧至手术结束。</li>
<li>将动物置于加热垫上，呈仰卧位，以在手术期间维持体温。插入胃管至瘤胃，以防止过度膨胀。 </li>
<li>剃除腹部腹侧毛发，使用三次普尔碘外科擦洗液对皮肤进行术前消毒。随后覆盖手术巾，确保手术区域（从脐部至腹部尾侧）充分暴露。 </li>
<li>使用电刀从脐部开始向尾侧做一条15–20 cm的正中切口，于腹腔右下象限定位回盲皱襞。随后将远端回肠和盲肠提出腹腔外。整个操作过程中应尽量减少对肠管的牵拉，并注意保持外置肠段湿润，使用37–39°C无菌磷酸盐缓冲液（PBS；pH 7.2） </li>
<li>测量一段85 cm的回肠（即“肠段”），然后在该肠段两端分别用多伊恩钳（肠钳）和大型凯利钳夹住。在肠段内将建立“袢”以及袢之间的“间隙”。多伊恩钳置于将进行吻合（anastomosis）的一侧回肠端，凯利钳则置于肠段侧的回肠端。</li>
<li>在每把多伊恩钳和凯利钳之间剪断回肠，并用60 ml温热的磷酸盐缓冲液（PBS）轻柔冲洗指定用于制备肠段环的肠道部分两次，以去除内容物。 </li>
<li>广谱抗生素混合液（200 mg 芪诺沙星和 250 mg 甲硝唑溶于温热 PBS，总体积 60 ml）均匀分布于肠段内，作用 30 分钟。 </li>
<li>将回肠近端和远端的断端（不包括肠段本身）进行吻合，以重建连续且具有功能的肠道通路。首先，在肠管的系膜侧和对系膜侧分别放置两针固定缝线，以对齐回肠断端。随后，采用连续单纯缝合方式（2-0 Vicryl缝线），从肠管两侧完成缝合，将两断端连接在一起。 </li>
<li>在吻合口处注入温热的PBS（3-5 ml），以检查是否存在渗漏或缝线失效。随后，将Kelly止血钳的尖端紧贴吻合口附近的肠管浆膜表面，并在吻合口处向内推进，以确认肠腔足够宽敞且通畅。</li>
<li>从肠段中移除抗生素混合液。用可吸收缝线（2-0 Vicryl）采用连续单纯缝合方式闭合肠段两端，随后使用2-0 Vicryl进行内翻缝合。</li>
<li>85 cm长的肠段被分为三个15 cm长的“袢段”、两个位于袢段之间各15 cm长的“间隔段”，以及位于肠段两端各5 cm长的钝端腔室（图1）。袢段通过使用2-0丝线在肠管周围结扎形成。值得注意的是，在此操作过程中不结扎主要的肠系膜血管，以保证肠道的血液供应，维持肠组织的活性。此外，结扎线应留得较长，以便后续用于固定导管。</li>
<li>导管（即硅胶管）使用永久性记号笔进行单独标记。在距导管末端4–5 cm处放置一个环绕导管的硅胶球（直径5 mm），以帮助防止导管从肠管中滑出（图1）。经高压灭菌后，将一种非抗生素类软膏（Orbeseal）无菌地注入导管末端（3–5 mm），以确保导管保持通畅（即避免因肠袢内脱落的黏膜堵塞导管）。 </li>
<li>在三个环的头端各做一个小切口。使用导管导入器（即“血管扩张器”）扩大每个切口，然后将一段6-8 cm长的导管向尾侧插入环内，直至硅胶球进入管腔（图1）。</li>
<li>用2-0 Vicryl缝线在导管周围行荷包缝合固定肠壁。通过将导管与标记肠袢头端的丝线结扎，进一步将导管固定于肠管上。</li>
<li>将氨苄青霉素（5 ml；100 mg/ml，溶于温热 PBS）注入每个肠袢及肠间隙，然后将肠道放回腹腔。通过腹部切口将头孢唑林（8 ml；100 mg/ml，溶于温热 PBS）注入腹膜腔。 </li>
<li>在腹壁中线切口附近做一个小的穿刺切口，将导管从此处引出体外。</li>
<li>根据腹腔内导管的位置和张力进行调整。腹肌采用间断单纯缝合（可吸收缝线；Catgut #3）关闭，皮肤采用间断水平褥式缝合（不可吸收缝线；Supramid #1）关闭。</li>
<li>将一根弯曲的中空不锈钢管（内径 7 mm；外径 10 mm；长 65 cm）插入腹部切口附近的皮下，经皮下隧道引导至颈部后方肩部之间的出口位置。将导管插入该管中，并向前推进至少达到管长的 50%。然后从出口处的皮肤外拉出带导管的不锈钢管，使导管暴露出来。</li>
<li>在穿刺切口处调整导管张力，并使用Supramid #1缝线关闭皮肤。</li>
<li>单个导管被识别后置于绷带“袋”内，该袋使用Supramid #1缝线固定于皮肤上。该袋可保护导管免受后续损伤。</li>
<li>术后，绵羊肌肉注射氟尼辛（2.2 mg/kg，首次剂量），随后以维持剂量1.1 mg/kg，每日一次（s.i.d.），连续给药3天。同时，绵羊还分别肌肉注射止血敏（Hemostam，3 ml）和恩诺沙星（enrofloxacin，2.5 mg/kg），前者每日一次，持续3天，后者每日一次，持续5天。动物通过静脉持续输注含5%葡萄糖的Plasmalyte 148溶液，采用蠕动泵恒速输注，确保输注速率（145 ml/hr）不受体位影响。允许动物自由饮水。 随意摄取但需限制饲喂，直至瘤胃和肠道功能恢复正常。密切监测（每日两次）采食量、饮水量、体温、粪便和尿液排出情况、肠鸣音、腹部不适、精神状态及血糖浓度；必要时调整静脉输液中的葡萄糖浓度，以维持血糖在正常范围内。术前及术后立即检测血液生化和血液学指标（包括白蛋白、碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶、淀粉酶、钙、胆固醇、肌酐、葡萄糖、无机磷酸盐、总胆红素、总蛋白、尿素、球蛋白、钠、钾、氯、氧分压、pH、二氧化碳分压、碳酸氢盐和总二氧化碳、红细胞和白细胞计数、红细胞压积、血红蛋白、白细胞分类计数和血小板计数），之后每隔一天检测一次。一旦肠道功能恢复正常，即停止静脉输液治疗，并将动物转移至围栏（即术后5–7天）。动物饲养于单独的圈舍中（彼此可见），以减少应激以及同伴啃咬导致导管袋受损的风险。</li>
<li>为将处理液注入单个循环管路，使用带有18号钝头针头的无菌注射器将5 ml处理液注入导管中。为确保全部处理液注入管路，随后再向导管内注入3 ml PBS。</li>
</ol>
关键点：
对手术成功至关重要的操作步骤包括：（1）在建立吻合口前，确认肠道未发生自身扭转；（2）确保吻合口的完整性和通畅性；（3）使用结扎线在标记肠袢头端的位置，将导管充分固定于肠袢壁，同时确保固定方式不影响导管的通畅性；（4）尽量减少对肠道的操作，并保证外置的肠道保持湿润；（5）确保导管张力适当；（6）在肌肉和皮肤缝合过程中，避免损伤导管的完整性；（7）防止绵羊术后过度进食（即在术后肠麻痹期间），以免引起瘤胃积食和瘤胃功能障碍；（8）确保动物在术后前3-5天接受足够的静脉输液治疗，密切监测血糖浓度，并根据需要调整静脉输液中的葡萄糖浓度，以预防低血糖。 <img src="/files/ftp_upload/1301/1301fig1.jpg" alt="带导管放置的肠道吻合示意图，显示手术连接点。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 图1. 带导管的回肠袢示意图。注意在绵羊回肠一段85 cm长的“肠段”内，建立了三个15 cm长的带导管“肠袢”、两个位于肠袢之间的15 cm长非导管“间隔段”，以及两个5 cm长的末端段。

<ol><li>Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Clostridium+perfringens+beta-toxin+on+the+rabbit+small+intestine+and+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon.</a> Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).</li>
<li>Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+and+molecular+characterization+of+Salmonella+typhimurium+infection+in+neonatal+calves%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves.</a> Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).</li>
<li>Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+enterica+serovar-host+specificity+does+not+correlate+with+the+magnitude+of+intestinal+invasion+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep.</a> Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).</li>
<li>Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+intestinal+%27loops%27+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).</li>
<li>Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+the+growth+and+differentiation+of+b+cells+isolated+from+follicles+from+ileal+Peyer%27s+patch+of+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep.</a> Immunology. 75, 601-607 (1992).</li>
<li>Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agents+that+activate+protein+kinase+C+resue+sheep+ileal+Peyer%27s+patch+B+cells+from+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis.</a> Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).</li>
</ol>

所有涉及实验动物的操作均经机构动物护理委员会批准（动物使用协议编号 #0609），并遵循加拿大动物护理委员会制定的指南。 
我们没有需要披露的内容。

在本实验中，我们成功在绵羊回肠内建立的肠段中置入了导管。通过严格执行术后护理，动物在术后迅速恢复，并于手术后5-7天恢复正常的活动。我们确定，在肠段内建立导管不会影响肠道黏膜或免疫功能（数据未显示），且动物术后至少可存活8周。该方法使得在动物术后恢复期结束后，能够在较长时间内向不同的免疫区室引入多种处理，并对这些处理的生理和免疫学效应进行实证测量。
未来实验的一个重要考虑因素是小肠内肠段的位置。在本实验中，我们通过手术在“具有免疫功能的回肠”区域创建了肠段，该区域通常由回肠（连续性）派伊尔结（5,6）界定。这一区域可向前延伸至回盲褶上方约2米处。尽管从解剖学角度这一区域被视为空肠，但从免疫功能角度来看则属于回肠，这凸显了在描述肠道区域时需重视其功能特性。

<table><tbody><tr><td>外科手套</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>103091</td><td></td></tr><tr><td>外科口罩</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>MAX53013</td><td></td></tr><tr><td>手术衣</td><td>加拿大魁北克省圣海辛特兽医药品分发中心公司</td><td>3365</td><td></td></tr><tr><td>OB围裙</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>900062</td><td></td></tr><tr><td>手术帽</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>903271</td><td></td></tr><tr><td>EZ Scrub 刷子</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>BDC377479</td><td></td></tr><tr><td>麻醉机</td><td>博伊尔</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Sodasorb</td><td>西部药品分发中心有限公司</td><td>108638</td><td></td></tr><tr><td>喉镜</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>喉镜片（Miller喉镜片 #4）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>902667</td><td></td></tr><tr><td>气管插管（7.0 - 8.5 mm）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>利多卡因气管内喷雾</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>103364</td><td></td></tr><tr><td>乙酰丙嗪</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>AUS01020</td><td></td></tr><tr><td>格隆溴铵</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>SAB2880</td><td></td></tr><tr><td>酒石酸布托啡诺</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>AYE304541</td><td></td></tr><tr><td>地西泮</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>sab790</td><td></td></tr><tr><td>硫喷妥钠</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>103508</td><td></td></tr><tr><td>盐酸肾上腺素</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>103856</td><td></td></tr><tr><td>多沙普仑</td><td>斯特拉斯科纳药房</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>西部药品分发中心有限公司</td><td>100339</td><td></td></tr><tr><td>Hemostam</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>103857</td><td></td></tr><tr><td>氟尼辛</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>sch140100</td><td></td></tr><tr><td>恩诺沙星</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>hll0049</td><td></td></tr><tr><td>甲硝唑</td><td>西部药品分销中心有限公司</td><td>101653</td><td></td></tr><tr><td>氨苄青霉素</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>NOV67185-6</td><td></td></tr><tr><td>头孢唑林</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>nov69397</td><td></td></tr><tr><td>电刀</td><td>Macan</td><td>MV8</td><td></td></tr><tr><td>加热垫</td><td>Kane</td><td>PHMD-48</td><td></td></tr><tr><td>胃管（Nalgene 软管 5/16）&quot; ID</td><td>Fisher Scientific</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>持针器</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>108338</td><td></td></tr><tr><td>艾迪生·布朗镊子</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>911075</td><td></td></tr><tr><td>大鼠牙用镊</td><td>加拿大魁北克省圣海辛特市兽用药品分发中心公司</td><td>5275</td><td></td></tr><tr><td>凯利钳</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>901133</td><td></td></tr><tr><td>蚊式止血钳</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>108471</td><td></td></tr><tr><td>卡马尔特钳</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>901225</td><td></td></tr><tr><td>手术刀柄</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>900285</td><td></td></tr><tr><td>22号手术刀片</td><td>西部药品分发中心有限公司</td><td>900511</td><td></td></tr><tr><td>梅茨鲍姆剪刀</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>901166</td><td></td></tr><tr><td>锐-锐剪刀</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>108264</td><td></td></tr><tr><td>止血钳</td><td>西部药品分发中心有限公司</td><td>901213</td><td></td></tr><tr><td>艾利斯组织镊</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>901201</td><td></td></tr><tr><td>Doyen&amp;rsquo;s 钳</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>904226</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢碗</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>903601</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢穿刺器（弯曲型）</td><td>本地供应商</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>导管导入器</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>11440</td><td></td></tr><tr><td>手术巾</td><td>加拿大魁北克省圣海辛特市兽用药品分发中心公司</td><td>7972</td><td></td></tr><tr><td>一次性铺巾</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>900035</td><td></td></tr><tr><td>无菌巾</td><td>加拿大魁北克省圣海辛特市兽药分发中心公司</td><td>2323</td><td></td></tr><tr><td>盖布（40 x 40 cm）</td><td>加拿大魁北克省圣海辛特兽用药品分发中心公司</td><td>8358</td><td></td></tr><tr><td>手术巾（7&quot; ×11 &amp;#188;&quot; 开启</td><td>加拿大魁北克省圣海辛特市兽用药品分发中心公司</td><td>2694</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl（2-0）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>JJMJ333H</td><td></td></tr><tr><td>丝线 2-0</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>105248</td><td></td></tr><tr><td>羊肠线 #3</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>CSL547-2070</td><td></td></tr><tr><td>Supramid #1</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>CSL547-3040</td><td></td></tr><tr><td>缝合针（切割型与非切割型）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>硅胶管（0.040）&quot; ID，0.085&quot; OD</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-15D</td><td></td></tr><tr><td>Orbeseal 软膏</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>106344</td><td></td></tr><tr><td>透明硅胶（732 多用途密封剂）</td><td>本地供应商</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>钝端针</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>905035</td><td></td></tr><tr><td>标记笔（工业用永久性）</td><td>本地供应商</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>导管袋（由7.5 cm弹力胶带制成）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>104094</td><td></td></tr><tr><td>医用胶带（2&quot;)</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>103842</td><td></td></tr><tr><td>医用胶带（1&quot;)</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>VLMRENF20</td><td></td></tr><tr><td>4x4 纱布垫</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>107551</td><td></td></tr><tr><td>纱布粘连</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>107633</td><td></td></tr><tr><td>Elastoplast 7.5 cm</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>104094</td><td></td></tr><tr><td>Elastoplast 可撕裂型绷带</td><td>Western Drug Distribution Center, Ltd.</td><td>104093</td><td></td></tr><tr><td>注射器（60 ml）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>104004</td><td></td></tr><tr><td>注射器（10 ml）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>bdc301604</td><td></td></tr><tr><td>25G 针头</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>BDC305122</td><td></td></tr><tr><td>20G 针头</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>BDC305175</td><td></td></tr><tr><td>18G 针头</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>903353</td><td></td></tr><tr><td>Intracath IV 导管（16G 8&quot;)</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>bdc3831621</td><td></td></tr><tr><td>静脉输液器（10滴）</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>101797</td><td></td></tr><tr><td>0.9% NaCl 溶液</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>BAXJB1322P</td><td></td></tr><tr><td>Plasmalyte 148 溶液</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>BAXJB2534</td><td></td></tr><tr><td>葡萄糖</td><td>西部药品分发中心有限公司</td><td>MCT60190</td><td></td></tr><tr><td>蠕动泵</td><td>Cole-Parmer</td><td>7524-10</td><td></td></tr><tr><td>家畜标识耳标粘合剂</td><td>本地供应商</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Germex 溶液</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>mtc60270</td><td></td></tr><tr><td>异丙醇</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>104590</td><td></td></tr><tr><td>斯坦己定清洁剂</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>109248</td><td></td></tr><tr><td>Prepodyne 溶液</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>105710</td><td></td></tr><tr><td>Prepodyne 擦洗剂</td><td>西部药品配送中心有限公司</td><td>105711</td><td></td></tr></tbody></table>

反刍动物肠段插管术

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

肠道是一个复杂的结构，不仅参与营养物质的吸收，还在个体与外界环境之间发挥屏障作用。因此，肠道在免疫监视及抵御肠道病原体方面起着关键作用。研究肠道生理学与免疫学常采用“肠道环段”作为实验模型。目前大多数环段模型均为不可恢复性外科手术模型，用于研究肠道在短期内（<24小时）发生的变化（1-3）。我们此前建立了一种可恢复性肠道环段模型，专门用于检测绵羊在接触疫苗、佐剂和病毒后，肠道内长期（<6个月）的免疫学变化（4）。该方法将处理措施局限在特定的“环段”区域，使我们能够对该部位的肠道进行取样。该方法的一个显著缺点是仅有一个给药时机（即手术时）。此外，肠道黏膜和管腔内容物的样本只能在实验结束时采集。上述模型其他重要的局限性在于，手术操作及相关术后处理措施（如抗生素和镇痛药的使用）可能直接影响处理因素本身和/或改变免疫功能，从而干扰实验结果。因此，我们对肠道环段模型进行了改进，将长期留置导管植入环段中。绵羊在手术后可完全恢复，且对外置导管无不良反应。值得注意的是，在环段中建立导管后，我们可在术后恢复期完成、且术中及术后用药已清除的情况下，在较长时间内多次给予不同处理。

我们介绍一种用于在绵羊回肠内对“肠段”进行插管的新型外科手术方法。动物在术后恢复且抗生素和镇痛药物完全清除后，可通过导管直接向肠段内递送多种处理物质。

肠道是一个复杂的结构，不仅参与营养物质的吸收，还作为个体与外界环境之间的屏障……

肠道是一种复杂的结构，不仅参与营养物质的吸收，还在个体与外界环境之间起到屏障作用。因此，肠道在免疫监视以及抵御肠道病原体方面发挥着关键作用。研究肠道生理学和免疫学通常采用肠段环作为实验模型。这些肠段模型中的许多均为不可恢复的外科手术方法，用于研究肠道的短期变化。我们先前建立了一种可恢复的肠道环模型，专门用于检测绵羊在接触疫苗、佐剂和病毒后肠道内长期的免疫学变化。该方法的一个显著缺点是在手术时仅有一个机会向肠段内给予试剂。同样，肠道黏膜和肠内容物的样品只能在项目终点时采集。因此，我们通过在肠道内插入长期留置的导管，对肠道模型进行了改进。这些器械包括肠道手术中使用的 DO'S 钳，也称为肠道钳。钳子是确保肠道在手术过程中不受损伤的重要器械。实验中的导管使用永久性记号笔标记黑色记号，然后进行灭菌处理。每根导管末端内插入眼用软膏，或使用罗勒（basil）作为非抗生素屏障软膏。使用手术刀片切割立体条状敷料。如有需要，可使用电灼器分离皮肤和肌肉组织。虽然也可使用手术刀片进行相同操作，但组织出血会更为明显。使用手术刀片做一个单点刺切口，形成一个小孔，以便用梅岑鲍姆剪刀切开腹膜。盲肠位于腹部右下象限，可作为解剖标志。升结肠与盲肠头侧相连，此处同时标示了回肠和盲肠。然后将肠管放回腹腔内。使用一段预先剪好的丝线缝合材料来测量将建立15厘米长肠袢的肠段长度。该肠段包含约85厘米的回肠。用多宁止血钳夹住肠段一端的非袢侧，用较大的凯利止血钳夹住回肠袢侧，然后在两钳之间切断肠管。另一侧重复相同操作。用60毫升无菌生理盐水冲洗肠段两次。随后将60毫升广谱抗生素溶液注入肠段内，尽可能均匀地分布于整个肠段长度，并保留30分钟。将回肠切开的两端以双固定缝线方式进行吻合。使用缝线将回肠两端对齐，并采用连续单纯缝合方式。用可吸收的2-0薇乔缝线将肠管一侧侧缘与另一侧连接。然后将回肠翻转，于另一侧重复进行缝合。在吻合口处注入5 mL无菌生理盐水，以检查是否存在渗漏。在此处，将持针器的末端轻柔地插入吻合口处的回肠，以确保管腔足够宽敞且通畅。随后，将广谱抗生素溶液从肠段中轻柔移除。肠段的钝性断端采用双层缝合封闭。肠段每一端先使用可吸收的2-0薇乔缝线进行连续单纯缝合，再行内翻缝合。肠袢的形成通过使用2-0丝线将肠段固定而成。第一条结扎线位于肠段钝端五厘米处。重新测量肠段长度，以确保其有足够的长度来支撑所有肠袢。创建第一个肠袢。在距离第一根缝线15厘米处，以套扎方式放置一根丝线结扎线，从而形成袢。需要注意的是，结扎缝线的末端应留得较长，因为这些末端将用于将导管固定在袢壁上。在每个袢的壁上做一个小切口。一种黄色的一次性血管扩张器可扩大切口，以便将导管引入袢的管腔内。导管上的硅胶珠有助于防止导管从袢中滑出。采用荷包缝合技术紧密闭合切口。通过使用先前用于界定肠段的结扎缝线将导管固定在肠段壁上，进一步加固导管。为明确显示肠段，导管已牢固固定，本图中高亮显示了插管的肠段。此处共高亮显示了三个插管肠段。需要注意的是，这些肠段呈现粉红色，外观健康且有活力，表明手术操作未影响其血液供应。再次观察，肠袢外观健康。在原腹部切口附近做一个刺破切口。将导管经切口引出体外，并将带有导管的肠袢放回腹腔内。使用3号可吸收肠线以单个间断缝合方式缝合腹壁。皮肤采用不可吸收的2-0尼龙线，以间断水平褥式缝合方式闭合。使用不锈钢空心管在皮下隧道式引导导管。将导管插入腹壁切口附近，皮下走行，从颈部基底部与两肩之间穿出皮肤。此出口位置对于保护导管免受后续损伤至关重要。将导管插入导管鞘内，并向前推进至少达到导管鞘长度的50%。将带有导管的导管管从出口处的皮肤中抽出。使用不可吸收的2-0尼龙缝线缝合皮肤切口。导管做好标记后放入袋中，待需要时使用。此图片显示了一只术后五天的绵羊，动物精神状态良好，警觉且反应灵敏，并已恢复正常的饮食。在本实验中，我们成功将长期导管植入绵羊回肠内建立的肠段中。这使我们能够在不同肠段内，对各种处理后所引起的生理和免疫学变化进行测量。该手术的关键步骤包括：在回肠中建立肠段，通过无菌生理盐水冲洗去除肠段内的esta，向肠段内注入广谱抗生素，回肠的吻合，从肠段中清除抗生素，肠段的钝性封闭，在肠段内建立末端环路，将导管插入环路中，并对环路内的导管及导管外端进行固定。本示意图展示了本视频中所述导管化肠段手术的示意图。请注意，该85厘米长的绵羊回肠肠段内包含了三个15厘米长的导管化环路，环路之间设有两个15厘米长的非导管化间隔区，以及两个5厘米长的末端区段。

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科研

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生物学

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