Name: 制备及使用幻影病变实践细针穿刺活检 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-29T21:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 26 s
Description: 学习使用纸板、密封胶和香蕉制作幻影病变模型，用于细针穿刺活检技能培训。该方法为细胞病理学学员提供安全有效的实操练习工具，帮助掌握标本采集与涂片制备技术。

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<ol style="list-style-type:upper-alpha;">
<li>制备模拟病灶（建议在细针抽吸（FNA）熟练度训练实际操作前约38至48小时制备模拟病灶（图1），或使用来自FNA Source（美国）的即用型“AV模拟体”。模拟病灶（冷藏保存，切勿冷冻）可在训练前3至4天预先制备并储存。</li>
<li>练习FNA熟练度：尽管本演示采用Shidham的THFV（带功能阀的组织采集器）（FNA Source，美国），但也可使用其他任何FNA系统进行练习（图2）。</li>
<li>将抽吸物涂布并处理于玻片上（图3）。</li>
</ol>
所需材料
<ol style="list-style-type:lower-alpha;">
<li>透明硅橡胶密封胶——可在多家建筑/家居装修商店购买。多个品牌可供选择，包括 GETM、DAP、Red Devil、White Lightning 及本地连锁品牌。我们使用的是 Clear Silicone Rubber，White Lightning Products，Cleveland, Ohio, USA，<a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html</a>）</li>
<li>打胶枪</li>
<li>一块塑料保鲜膜（我们使用的是 Saran Cling Plus Wrap，SC Johnson &amp; Son Inc，Racine, WI, USA，<a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp</a>）</li>
<li>乳胶手套</li>
<li>直径较宽的香蕉或香肠。</li>
<li>坚固且平整的底板（约 6 英寸 × 6 英寸），可由厚纸板、丙烯酸板或其他材料制成。</li>
<li>细针穿刺抽吸（FNA）操作设备
<ul>
<li>25 号皮下注射针头</li>
<li>Shidham 的 THFV 装置（或其他用于执行 FNA 的组件）</li>
<li>载玻片</li>
<li>染色试剂盒</li>
</ul>
</li>
</ol>
逐步详细说明
A. 模拟病灶的制备（在练习细针穿刺抽吸（FNA）熟练度前1至2天制备模拟体，图2），或使用来自美国FNA Source的即用型“AV模拟体”。
<ol>
<li>裁剪一块6英寸×6英寸的支撑板。</li>
<li>切取一段2.5英寸长的片段 假性病灶核心 （香蕉或香肠）</li>
<li>在底板上挤出一层0.5英寸厚的密封胶。</li>
<li>按压 模拟病灶核心 轻轻地插入这一层密封胶中。 </li>
<li>在原有密封胶上再添加更多密封胶 假性病灶核心 使其完全嵌入密封胶堆中，避免裹入气泡。</li>
<li>调整并修整密封胶的形状 假性病灶核心 戴手套的手</li>
<li>取一块6英寸×6英寸的塑料薄膜，覆盖在密封胶堆上，然后用一只干净的戴着手套的手将胶堆表面调整成光滑的凸面形状。</li>
<li>在温暖处，让密封胶堆比产品说明中提到的固化时间再延长6-8小时（通常为24小时）。</li>
<li>固化后，密封胶应变得坚实，且塑料薄膜可轻松剥离。</li>
<li>FNA 模拟病灶在密封胶堆完全固化至中心部位后约 8 小时即可用于练习 FNA 操作 假性病灶核心 （香蕉或香肠）</li>
</ol>
B. 在 AV 模拟病灶上练习细针穿刺活检技术熟练度。
获取高质量且足量的细针穿刺抽吸物，并制备出良好质量的直接细胞学涂片，应关注以下关键点——
<ol style="list-style-type:upper-roman;">
<li>针头规格——如操作名称所示，较细的针头（更高的规格数值）可获得血液稀释最少且质量更佳的穿刺抽吸物。为在优势与局限之间取得适当平衡，推荐使用22至25规格的针头，以在不影响细针抽吸物质量的前提下，确保针头具有最佳的机械稳定性。</li>
<li>在细针抽吸过程中控制真空施加与释放的适当顺序——这一点至关重要，可确保每次进针时将采集的细胞逐步推向针头连接部。然而，抽吸物不应进入针头与注射器连接组件的区域。若未避免此情况，可能导致材料难以取出制片（不过，此类材料仍可用于细胞块制备，或通过Cytospin、滤膜法等浓缩方法，以及近年来的液基细胞学制备方法进行处理）。</li>
<li>掌握适当的抽吸标本处理技能，包括直接涂片制备以及现场对标本充分性进行评估并合理分流，以用于后续辅助检测，如为选择性免疫细胞化学染色制备细胞块、对淋巴组织增殖性病变进行选择性流式细胞术免疫分型、将无菌穿刺物送检微生物学研究，以及为分子检测（如细胞遗传学等）提供材料。</li>
</ol>
乙. 进行细针穿刺活检（FNA）操作（图中使用的是Shidham的THFV [1]（FNA Source，美国）；但也可使用其他任何FNA系统进行练习）（图3、4、5）。
<ol>
<li>关闭阀门，准备FNA组装。 </li>
<li>定位病灶并将针尖插入病灶内。</li>
<li>打开阀门，连接真空装置，通过针头至其尖端，逐次抽吸病灶中具有代表性的细胞成分 来回 将针头插入病灶。</li>
<li>保持负压，通过将针头以不同方向插入病灶，抽取病灶不同区域的样本。</li>
<li>关闭阀门以断开针管腔内的真空。</li>
<li>通过短暂断开注射器阀门与针头的连接，使压力与环境条件平衡 &amp; 重新连接。如果使用带有内置步骤的特殊装置（例如“THFV”），则通过遵循阀系统中的不同步骤，Ba1至Ba6的这些及其他步骤将自动协同完成[1]。</li>
<li>在关闭阀门的情况下将针头从病灶中取出，以防止标本因毛细作用回流至病灶内，除非针座端存在轻微负压。</li>
<li>将吸取的样本内容物移至玻片上，以制备直接涂片（见下文）（图6）。</li>
</ol>
Bb. 对抽吸标本进行适当的分诊处理 
将抽吸物均匀涂布在玻片上，制备高质量的直接涂片（图6），随后进行适当的染色和分诊（图7、8）。
<ol>
<li>如（图6）[2]所示，将脱落于载玻片上的穿刺物滴液可通过多种方式进行涂片。常规方法为“a”。然而，若标本为混有微小组织碎片的血液，则可通过倾斜载玻片去除多余血液，再将微小组织碎片置于该载玻片与另一张载玻片之间，参照方法“a”进行推片。若穿刺物主要为不含微小组织碎片的悬液（例如来自淋巴增殖性病变），则应参照方法“b”或“c”进行涂片。</li>
<li>涂片可在现场评估标本充分性期间，根据不同的染色方法采用多种方式进行处理和固定。但最佳方法是将所有涂片自然风干。风干后的涂片可在甲醇固定后使用罗曼诺夫斯基类染液（如Diff-Quik染色、Wright染色），或在生理盐水再水化及后固定（95%乙醇或优选含5%乙酸的95%乙醇）后使用巴氏染色[3]。该方法可显著减少血液成分干扰带来的影响[3]。</li>
<li>根据现场评估标本充分性时的初步细胞形态学发现，可酌情推荐进一步分选处理（如选择性制备细胞块、电子显微镜检查、微生物培养、流式细胞术、分子检测及细胞遗传学分析等）。</li>
</ol>
代表性结果：
<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="使用硅胶密封胶、塑料薄膜和支撑板进行香蕉或香肠状材料特性实验。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">请点击此处查看图1的放大版本</a>。
 
图 1. 制备用于细针穿刺（FNA）技能训练的AV模型所需材料（*我们使用了Saran塑料薄膜，在硅胶完全固化后拆除时不会粘连。）
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="静态平衡示意图；使用填缝剂、包裹材料和支持板创建模拟病灶的步骤。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 2"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">请点击此处查看图2的放大版本。</a>
 
图2. 准备动静脉模拟病灶
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="细针穿刺抽吸（FNA）技术示意图，详细说明了负压使用和针头插入步骤。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 3"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">请点击此处查看图3的放大版本。</a>
 
图3. FNA 操作中的关键步骤。
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="细针穿刺抽吸术示意图；注射器装置；压力平衡；分步指南。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 4"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">请点击此处查看图4的放大版本。</a>
 
图4. 超声内镜引导下细针穿刺抽吸术（EUS-FNA）——关键步骤概要*（参见图3）
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="病灶穿刺抽吸取样示意图；显示正确的和错误的防回血-空气阀门操作技术。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 5"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">请点击此处查看图5的放大版本。</a>
 
图5. 与细针穿刺（FNA）操作关键步骤相关的常见问题。
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="细胞病理学技术示意图；涂片制备方法：双片夹压法、刮片法、推片法。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 6"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">请点击此处查看图6的放大版本。</a>
 
图6. 采用两张载玻片夹压法制备细针穿刺标本的直接涂片。
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="湿固定与空气干燥涂片，胰腺病变诊断中的细胞学比较，显微图像。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 7"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">请点击此处查看图7的放大版本。</a>
 
图7. 湿固定与空气干燥涂片的比较。
<hr style="border-bottom:1px dotted #999999;">

<img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="Pap染色涂片对比；a：湿固定，b：空气干燥，细胞核更清晰，适用于细胞学分析。" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="figure 8"> 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">请点击此处查看图8的放大版本。</a>
 图8. 湿固定与空气干燥涂片的比较。

<ol><li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+%28THFV%29%3A+Shidham%27s+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li>
<li>Shidham, V. B., Epple, J. AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , 'Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids' First edition, Elsevier; W.B. Saunders Company. Chapter 15 207-235 (2007).</li>
<li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies%3A+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol%2C+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytologica%22%5BJournal%5D)">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li>
</ol>

细针穿刺活检（FNAB）作为一种经济、安全且快速的微创技术，被广泛用于各种肿瘤和病变的组织学诊断。该操作中，将一根18至27号的细针插入病灶，在不同区域反复进出，同时施加可控的、强度可变的负压（抽吸），负压范围从仅依靠毛细作用的最小负压，到注射器内约10 ml的负压，以获取用于诊断的组织材料。通常优先选用数字较大、更细的针头（即更细的规格），以获得良好的细胞学样本用于制备直接涂片。而18G较粗针头则可获取更多样本，适用于制备细胞块、流式细胞术、电子显微镜、细胞遗传学、微生物培养等。尽管该操作较为简单，但在各个步骤中精确控制负压的施加与释放，并协调配合，对于获得最佳结果极为关键。
由于缺乏专门设计的高产量穿刺针，目前通常使用传统的皮下注射针头或其改良形式来执行该操作。然而，皮下注射针头存在诸多局限性，若以常规方式使用，会导致样本获取量较低。此外，通常需要特殊的注射器握持装置，这进一步增加了操作的复杂性。因此，由于市场上缺乏合适的细针抽吸活检（FNAB）针具装置，这一高度灵活的操作常面临样本采集不足的问题。最近，已有研究报道了一种可提高产量并具有可重复性的装置[1]。
此外，目前尚缺乏适合的模型供接受培训的医务人员（包括住院医师和进修医师）练习细针穿刺活检（FNAB）技术以提高操作熟练度。我们曾建立一种标准化模型，即将新鲜牛肝组织塞入乳胶手套中用于FNAB操作训练。然而，该模型难以在短时间内准备就绪，其中获取新鲜牛肝通常是最主要的限制因素。此外，处理肝脏组织可能引入与污染相关的干扰因素，成为显著的缺点。乳胶手套在经过数次针刺后容易发生泄漏，导致训练过程中可能出现污染隐患。
我们报道并描述了一种新颖但简单的方法，即将一小块香蕉（或香肠）嵌入市售的硅橡胶密封胶及其他易得材料中。该细针穿刺活检（FNAB）模拟病灶可保持真空密封，从而允许从嵌入的标本中抽吸物质，其过程等同于临床环境下对真实病灶进行的FNAB操作。在本视频中，我们演示了制作FNAB模拟病灶及练习FNAB操作的过程。此外，还简要展示了所获取标本的后续处理步骤，包括涂片制备和染色[2,3]。
由于填缝剂需要时间固化，因此应在练习前约24至48小时提前制备模拟病灶。也可从商业渠道（FNA Source，美国）获取类似的即用型模拟病灶。
用于练习细针抽吸活检（FNAB）熟练度的模拟病灶，可在临床环境中对患者进行FNAB操作之前，用于培训住院医师和进修医师。

制备和使用模拟病灶练习细针穿刺活检

Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

目前，包括住院医师和进修医师在内的医护人员缺乏合适的模型来练习细针穿刺活检（FNAB）操作。过去，我们曾建立了一种标准化模型，即在乳胶手套内填充新鲜牛肝用于FNAB训练。然而，该模型难以快速组织和准备，其中最难解决的问题是新鲜牛肝的获取。此外，处理肝脏时还存在污染相关的诸多问题，这也是一个显著的缺点。另外，乳胶手套材料在经过数次穿刺后容易发生泄漏，造成操作环境混乱。
我们建立了一种新颖且简便的方法，即将一小块香肠或香蕉嵌入市售的硅橡胶密封胶中。该模型能够保持真空密封，并可从嵌入的标本中抽吸物质，类似于临床肿块病变的细针抽吸活检（FNAB）操作。
针座中吸出的材料可按照实际细针抽吸活检（FNAB）过程中获取的标本进行处理，有助于进一步提高涂片制备和染色的技术熟练度。

由于缺乏易于获取且合适的病灶，受训人员练习细针穿刺活检（FNAB）相对具有挑战性。制备动静脉（AV）模型病灶用于练习FNAB操作并掌握熟练技术相对简便。

目前，包括住院医师和进修医师在内的医护人员缺乏合适的模拟模型来练习细针穿刺活检（FNAB）...

为制备模拟病灶，裁剪一块六英寸乘六英寸的硬纸板作为基板。在基板上覆盖一层半英寸厚的密封胶。然后取一段长两英寸半的香蕉，轻轻按入密封胶中。将香蕉作为模拟病灶核心，完全嵌入填缝剂中，避免裹入气泡。用一块塑料薄膜覆盖核心，并将其塑造成光滑的隆起形状。待填缝剂变硬并固化后，将其置于温暖处使支架完全固化。撕下保鲜膜，练习细针穿刺（FNA）技术，从香蕉中心获取样本，并练习涂片制备。我是来自威斯康星医学院病理科细胞病理学 division 的 Vino 博士。我是同部门的细胞病理学专科培训医师 George Varszegi 博士。今天我们将演示一种制备模拟病灶的方法，该方法使用易于获取且简单的工具和材料，用于练习FNAV操作技术的熟练度。我们通常采用此技术向细胞病理学专科培训医师和病理科住院医师介绍最终的细针抽吸活检操作流程。在后续培训过程中，这些专科医师和住院医师将在导师的监督下，通过对临床可触及的病灶进行细针抽吸操作，进一步提高其操作技能。那么，让我们开始吧。在计划进行细针抽吸活检（FNAB）练习的前一到两天，准备好模拟病灶。开始之前，在实验台上准备好一块纸板、一支填缝枪、一根未去皮的香蕉和保鲜膜。制备模拟病灶的第一步是裁剪一块六英寸乘六英寸的纸板，用作基板。接下来，切取一段长约两英寸的香蕉，作为模拟病灶的核心。在准备好模拟病灶核心后，使用填缝枪将约半英寸厚的填缝剂均匀涂抹在基板上。轻轻将模拟病灶核心按入湿润的填缝胶中。然后在模拟病灶核心上添加更多填缝胶，使其完全嵌入。佩戴手套操作时，注意避免在填缝胶中混入气泡。用手将填缝剂涂抹在模拟病灶核心周围，确保其被完全包覆。接着用一块6英寸×6英寸的塑料保鲜膜覆盖土堆状填缝剂，并将其塑造成光滑的凸面形状。将填缝剂土堆置于温暖处，使其固化时间比所用品牌填缝剂建议的固化时间再延长6至8小时。密封胶在接触空气后会固化。可将密封胶堆放在高于60华氏度的室温下静置，或在37摄氏度下孵育以加速固化过程。固化后，密封胶变硬，可轻松剥离塑料薄膜。此时，FNA模拟病灶已准备就绪，可用于练习FNA操作。在完成模拟病灶的制备并使其充分固化后，即可用于细针穿刺活检（FNAB）操作的练习。此处我们使用的是带功能阀门的组织采集器，但简而言之，也可使用任何其他FNA系统。THFB 由一根用于穿刺标本的针头、一个用于收集抽吸物的针座、一个用于控制装置内部压力的注射器以及一个用于连接和断开针座与注射器的阀门组成。首先准备 FNA 组件，此时应关闭连接针座与注射器的阀门。然后拉出注射器活塞，以在注射器筒内形成负压。然后将针头尖端插入病灶。打开阀门，使针座与注射器筒内的负压相连。负压将病灶内的物质吸入针头，并进入针座。在病灶内前后移动针头，以抽吸具有代表性的细胞成分样本。通过从不同方向将针头插入病灶，保持负压并采集病灶不同区域的样本。完成采样后，旋转阀门以断开注射器筒内的负压，并通过打开阀门使压力与外部环境平衡。接下来，旋转阀门以断开与外部环境和注射器筒的连接。在阀门关闭的情况下，将针头从病灶中取出。保持阀门关闭可使针座端维持轻微的负压，防止标本通过毛细作用回流至病灶内。类似于移液现象，您的组织样本现在已安全地保留在针头内。当您将针头从穿刺部位拔出后，应将抽吸物直接涂抹在玻片上，以制备直接涂片。一旦将一滴抽吸物排至玻片上，可根据抽吸物的性质采用多种方式将其推片展开，我们通常采用此处所示的方法，用两张玻片之间推片的方式均匀涂布样本。如果实际标本混有血液，可在放置第二张载玻片之前倾斜玻片以去除多余的血液。如果穿刺物主要为不含微小组织碎片的悬液（例如来自淋巴增殖性病变），可采用“肋样涂片法”，即用一张玻片的边缘在另一张玻片上制作类似肋骨排列的多条涂片；也可采用“推片法”，即用一张玻片在另一张玻片上推制成单层薄膜。制备好涂片后，可通过多种方法进行后续处理和固定。对于不同的染色方法，最佳做法是在一到两分钟内将所有涂片迅速风干。较厚或较湿的涂片可通过在空气中左右移动载玻片来加快干燥，或更优地使用吹风机或手持电池供电的便携式风扇加速干燥。使用风扇时需小心，避免产生气溶胶，特别是对于预期可能感染的病灶，在涂片干燥后应根据实验需求进行相应的染色处理。此处我们演示使用D快速染色法对空气干燥的涂片进行染色，D快速染色是罗马诺夫斯基类染色法中的一种，适用于特定染色时间。请遵循制造商的说明。我们发现，空气干燥可显著提高染色清晰度，如本例中经巴氏染色的涂片所示。对这些初步染色结果的分析将决定是否需要进行其他检测，例如选择性细胞块电镜检查、微生物培养或其他检测。成功完成模拟病灶穿刺后，即可正确吸取病灶材料，本例中为香蕉的糊状植物性物质。该材料可涂抹于玻片上，用于练习涂片和染色操作。我们刚刚向您展示了如何制备模拟病灶以练习细针抽吸活检（FNAB）的操作技能。在进行该实验时，需要牢记：应在技能考核前至少36小时制备模拟病灶，因为填缝胶需要一定时间才能完全固化。另一个关键点是在执行FNAV操作过程中，必须按照正确的顺序应用和释放负压，以获得最佳的抽吸物样本。以上就是全部内容。感谢观看，祝您练习顺利，非常感谢！

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科研

JoVE Journal

Biology

生物学

制备及使用幻影病变实践细针穿刺活检

本视频介绍了从髂嵴抽取骨髓以及制备涂片进行活检的技术。在示例中，我们对一名急性髓系白血病（AML）患者进行骨髓穿刺抽吸，并检查细胞以检测可测量残留病（MRD），后者是一种重要的预后生物标志物。...

骨髓穿刺：一种用于获取骨髓以检查细胞形态学的方法

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使用支气管内超声引导下经支气管针吸活检进行胸骨后甲状腺穿刺活检

本方案描述了高频超声（HFUS）在小鼠颈部淋巴结成像中的应用。该技术可优化颈部淋巴结形态、体积及血流的可视化与定量分析。同时展示了在影像引导下对颈部淋巴结进行活检，以及对淋巴组织进行处理以供组织学评估的方法。...

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