在果蝇的Wolbachia细菌感染
February 25th, 2007
我叫 Voia Friedman。我是普林斯顿大学的副研究员。今天，我将向大家介绍我制定的一些方案，这些方案用于反式感染，最初用于隔离，从受感染苍蝇的直升机中返回，然后帮助将直升机饲料注射到未受影响的航班。
所以基本上，这是一个非常简单的协议，可以隔离他以获得基础知识。您将从这个设备开始，从 mepo 开始，它包含一个过滤器，该过滤器位于您基本上需要放置的 E.So 之上，我们从大约一百只苍蝇开始。你把苍蝇茴香化，把它们放进过滤装置中，你可以只使用一个漏斗，这将很容易地在这个装置上添加我们的其他拟合物，并用 70% 乙醇清洗它。
你只要拿走，把未来带走，你可以扔掉乙醇，然后在你最后一次清洗三次后，你用分子水做，因为你不想让细菌离开，带着微量的乙醇。嗯，然后你只需走到一个新的武器门前，然后你在一个微型、真正的微型上旋转两分钟，然后你如何注射它。他只喂未受影响的苍蝇。
所以基本上拿双面胶来说，通常这些双面胶有两面，一边是贴纸，另一边是贴纸。所以把贴纸的一面朝上，因为那是你要粘的一面，上面飞着。基本上，你，气体设备，如果你在上面有这个灯，你就不会有气体流动，如果苍蝇在滑梯顶部，你就会醒来。
所以你可以直接引导流动，用胶带做一个小罩子，一个小腔室。然后，您将气体引导到苍蝇上。然后你把你的，这盏灯和胶带放在这里，你就有了你的苍蝇。
将苍蝇贴在胶带的顶部，它们都保持相同的方向，然后将它们的头朝向您将要带针的方向。因为那样你就可以刚好越过机翼，你确保既然它们飞了，你就不想飞了。如果他们在手术过程中醒来，不希望他们消失。
因此，请确保您对尾部的苍蝇翅膀施加一点提示和压力。如果他们的翅膀损坏了也没关系。当你摆脱时，当你把果蝇注射起来时，它们很可能会失去翅膀，所以它们会活下来。
那可以，那是有用的，因为你不会失去苍蝇，所以他在千分尺上涂上矿物油，用于针头的背面，然后注射针头，然后，你可以调整压力，使材料上升到针尖。我，我确实注射了 10 到 15 纳升之间，但只要我始终如一。好的，所以这个实验的一个重要细节是，一旦注射了应用，当你看到针头时，你需要尽可能地穿过腹部的上部。
因为在这里，基本上当针头穿透时，你有更大的空间可以上下移动。基本上，如果它很近，更靠近角质层，它们就不太可能在飞行中穿透重要器官。你，很可能不太可能在你的肠道上打一个洞，例如，如果这会杀死你正在进行手术的航班。
我叫 Voia Friedman。我是普林斯顿大学 Eric Hels 实验室的副研究员。今天我想告诉大家你刚刚看到的这个协议，演示。
所以做这个实验方案是因为我们想证明 UBA 能够穿过组织。所以 UBA 是地球上最成功的细胞内 paras 之一。感染 20% 至 70% 的昆虫和许多颗粒。
而且，就人类疾病而言，它非常重要，因为也会感染传播河盲症或 s 和 sis 等疾病的线虫。所以，CCA 是我们在这些蠕虫中必不可少的 endo。使用 CCA 也作为控制寄生虫病传播的手段，以及疟疾和登革热等蚊子的传播，人们非常非常感兴趣。
所以这个，这个，这个协议基本上是为了表明一旦 CCA 进入果蝇的腹腔，它们就可以穿过组织到达胚芽。所以基本上你在这里看到的是果蝇卵巢的 oph，一旦出现在叶子里，它就可以穿过粉红色的 peronial。她在卵巢周围。
然后它们穿过一个肌肉层。实际上，它们进入卵巢的第一个地方是体细胞干细胞图像。然后他们就可以到达种系。
这种细菌的传播方式与线粒体的传播方式相同，是通过母亲传播的，通过卵中的母蚜草植物传播。所以它们当然需要存在于种系中。这就是开发此协议的原因。
这个方案基本上非常有用，基本上传统上人们尝试反式感染 wbaa 的方式基本上是采用 wbaa 并引入一种新的昆虫物种。这将是通过对胚胎进行微注射。但这些要复杂得多。
基本上，我们只是利用了 o 生物学，因为它们能够穿过组织并进入干细胞组织，它们可以传递到种系。因此，从某些被感染的昆虫物种中获取 UBA 变得更加容易，它们可以传播给未感染的物种。可能我认为是注射本身。
基本上，你需要小心地尽可能地调动苍蝇。我们使用的是双面胶带，您需要基本上尽可能靠近针头，尽可能平行于门襟，这样您就不会深入。而且，在他们进行手术后，我们不太可能杀死苍蝇。
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概述
本文介绍了用于从感染苍蝇中分离并注射特定药剂的协议。所描述的方法简单明了，并使用专门的设备进行有效的分离。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 昆虫生理学
- 感染协议
背景
- 从感染生物体中分离药剂对于研究疾病机制至关重要。
- 协议必须高效且可重复以获得可靠的结果。
- 使用过滤器设备可以简化分离过程。
- 了解感染苍蝇和未感染苍蝇之间的相互作用可以为疾病传播提供洞察。
研究目的
- 开发一种简单的协议来从感染苍蝇中分离药剂。
- 促进将这些药剂注射到未感染苍蝇中。
- 增强对昆虫模型中感染动力学的理解。
使用的方法
- 利用过滤器设备进行分离。
- 从大约100只苍蝇开始进行协议。
- 用70%乙醇清洗苍蝇以确保清洁。
- 使用漏斗方便地转移到过滤器设备中。
主要结果
- 该协议允许有效地从感染苍蝇中分离药剂。
- 通过开发的方法，可以将药剂注射到未感染苍蝇中。
- 结果表明这是研究苍蝇感染的直接方法。
- 这些方法可以适应昆虫生理学中的各种研究需求。
结论
- 开发的协议对于分离和注射药剂是高效的。
- 这些方法可以推进昆虫传播疾病的研究。
- 进一步的研究可以基于这些协议探索感染机制。
常见问题
Executive Industry Relevance
This protocol enables tissue-crossing bacterial transfer in Drosophila, supporting mechanistic de-risking in target validation for intracellular symbiont-based interventions. By demonstrating germ-line transmission via somatic stem cell colonization, it provides a predictive model for evaluating Wolbachia-driven pathogen blocking strategies. The approach reduces reliance on complex embryonic microinjection, improving scalability in preclinical screening workflows.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables functional validation of intracellular symbionts as transmissible therapeutic agents.
- Operational Value: Supports hypothesis testing on tissue tropism and germ-line transmission efficiency.
- Strategic Value: De-risks target selection by confirming biological feasibility of symbiont spread in vivo.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable readouts on symbiont penetration into ovarian stem cell niches.
- Operational Value: Standardizes microinjection and immobilization techniques for reproducible symbiont delivery.
- Strategic Value: Enables high-throughput assessment of symbiont strains for tissue-crossing capacity.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models horizontal symbiont transfer between insect species, relevant to vector control applications.
- Operational Value: Uses Drosophila as a disease-relevant system to preclinically evaluate symbiont stability and transmission fidelity.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions on symbiont strains based on germ-line infiltration efficiency.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within early discovery to preclinical transition, enabling symbiont characterization prior to vector-based delivery system development.
- Discovery Biology: Tests mechanistic hypotheses on symbiont tissue traversal and stem cell localization.
- Screening: Delivers standardized, quantifiable symbiont transfer via controlled microinjection into anesthetized flies.
- Analytics: Measures symbiont presence in germline and somatic tissues as a functional output for strain comparison.
- Translational Research: Bridges discovery to preclinical by modeling interspecies symbiont transfer relevant to malaria and dengue control.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for evaluating symbiont strains across insect hosts.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in symbiont-mediated pathogen interference through validated germ-line transmission.
- Operational Value: Reproducible fly immobilization and injection protocol reduces variability in symbiont delivery.
- Strategic Value: Lowers biological risk in symbiont selection by confirming in vivo tissue penetration capability.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of symbiont candidates based on transmission efficiency metrics.
Implementation Considerations
- Expertise in Drosophila handling and microinjection techniques.
- Access to immobilization apparatus using double-sided tape and gas flow control.
- Standardization of injection volume (10-15 nL) and needle depth targeting abdominal cavity.
- Adaptation considerations for different insect species based on size and cuticle thickness.
- Practical limitation: Wing damage during immobilization may affect fly mobility post-procedure.
