6.5 天小鼠胚胎的解剖

我叫Kelly Shea，是Nielsen实验室的实验室主管，同时也是一名研究技术员。这项操作非常困难，因为许多人不知道如何区分不同的组织层。因此，你基本上需要逐层剥离所有组织，以暴露下方的胚胎，而此时的胚胎血管化程度很低，非常透明，难以辨认。

取用较为钝头的镊子和剪刀。首先，需在动物体中线附近夹住皮肤，并在此处进行第一刀切割。随后，从此处将皮肤向两侧拉开，暴露动物的腹部。

你会用镊子提起腹膜的一层薄膜，然后用剪刀将其剪开并向一侧翻开。你需要沿着动物的中线剪开，分离两侧的子宫角，它们在中间部位相连。你可以在其基部直接进行剪切。

你可能会同时获得大量脂肪。取下动物的整个子宫角，直接放入 PBS 中。

这是在角内的结构。这些是植入位点，1、2、3、4、5。你需要做的就是将它们分开。

基本上可以在这里的植入位点之间进行切割。只需从胚胎侧面夹住，将其撬开即可。此时暴露出来的是肛囊，即下方较为疏松的海绵状组织。

因此，胚胎应正好位于中央，就在这里。这是乳牙的尖端。您需要将其尖端朝上进行定位。

你最终需要从顶端向下约五分之一处进行剪切。胚胎应正好位于此处中央。我通常将其横向放置，用一对镊子夹住，并用另一对镊子固定，剪去其顶端，然后将其分离。

因此，一旦移去封口，就将胚胎立于其边缘。如您所见，在移去封口的位置会有一个开口，只需将镊子插入其中即可。是的。

此时，胚胎在去壳膜中非常松散。一旦将去壳膜打开，只要从其底部下方伸入，就能相对容易地将其取出。因此，它非常微小。

还有一些组织仍附着在胚胎上。你看到的这个位于胚胎顶端的是胚外胎盘锥体，此外还有一些其他组织仍然附着。

因此，我只需用移液器将其吸起。此时，你需要固定胚胎。我这里有一个装有PFA的培养皿。

我们希望研究候选基因。基本上，我们采用整体RNA原位杂交技术，在胚胎内原位可视化核酸的表达情况。我们特别感兴趣的这些基因，编码的是生殖细胞前体的潜在标记物，并且预测其在小鼠胚胎的特定时间点表达，有助于生殖细胞从潜在的前体细胞发育并成熟为生殖细胞。

我们非常感兴趣的一个因子，也是我们首次在这些第6.5天胚胎上进行整体原位杂交检测的因子，是骨形态发生蛋白（BMP4）。它属于TGF-β超家族，对生殖细胞的成熟至关重要，是生殖细胞成熟过程中绝对必需的因子。

此外，生殖细胞需要在胚胎内迁移并定位于胚胎原条附近。BMP4 在生殖细胞的信号传导及其成熟过程中均发挥关键作用，这是生殖细胞能够定位于原条所必需的。因此，首先需要明确观察目标，了解其尺寸大小以及操作尺度，并仔细坐下来进行周密规划。

该技术尤其取决于所使用的解剖显微镜类型。其中一个技术难点在于操作过程涉及大量精细操作，需要极其稳定的手部动作，以避免损伤胚胎。因此，应选择操作空间充足的解剖显微镜，同时确保实验所需的所有设备都已预先准备就位，从而最大限度减少在解剖过程中不必要的操作。

因此，除此之外，我认为你需要非常缓慢地操作，逐层剥离组织，以便清楚了解所操作的结构，并确保明确胚胎的位置。