Name: 6.5 DPC小鼠胚胎剖析 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: 学习6.5天小鼠胚胎解剖技术，用于研究早期胚胎发育中的基因表达模式和细胞谱系决定过程。该方法通过钝镊和剪刀精细分离组织层，成功分离原始条纹期胚胎，为发育生物学研究提供可靠基础。

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雌性小鼠生殖器官的解剖
<ol>
<li>使用压缩气体通过 CO2 窒息法对怀孕动物实施安乐死。</li>
<li>将动物仰卧置于吸水垫上，并用 70% 乙醇充分浸湿，以降低小鼠毛发污染解剖操作的风险。</li>
<li>捏起皮肤，用普通手术剪在体中线处做一个小的侧向切口。牢固握住切口上下方的皮肤，向头端和尾端方向拉开皮肤，以暴露腹部。</li>
<li>用镊子夹住腹膜并剪开，以暴露腹腔。</li>
<li>在体腔背侧区域找到生殖器官：两个子宫角、输卵管和卵巢。</li>
</ol>
原条期（6.5 天）解剖
<ol>
<li>通过夹住输卵管下方的子宫，沿子宫系膜剪下子宫角。将解剖好的子宫置于冰上预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）中。 <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="琼脂平板上的菌落形态，微生物实验，细菌生长观察。" width="263" height="132" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 1"> 图 1 </li>
<li>沿子宫角在每个着床部位之间进行切割，分离各个胚胎。 <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="植物组织培养实验示意图，展示愈伤组织形成与分裂过程。" width="575" height="171" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 2"> 图 2 </li>
<li>用钟表匠镊子插入周围肌层与包被的蜕膜组织之间，夹住肌性子宫内膜。向后剥离肌层，暴露出蜕膜。 <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="胚胎解剖过程；显微镜图像；发育生物学研究。" width="593" height="166" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 3"> 图 3 </li>
<li>在蜕膜顶端剪除一部分（约蜕膜组织的五分之一），以暴露被包裹胚胎的中腹侧或远端尖部。 <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="使用镊子进行组织培养解剖，显微镜图像用于显微分析研究。" width="589" height="212" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 4"> 图 4 </li>
<li>可用镊子尖端将胚胎从蜕膜中取出。用镊子在胚胎周围刺穿蜕膜，然后张开镊子撕开蜕膜。 <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="细胞显微注射过程，实验装置，显微镜图像，遗传物质导入。" width="249" height="200" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 5"> 图 5 </li>
<li>一旦胚胎被取出，Reichert膜以及外胚层锥体（滋养层）可能仍附着其上。可通过精细解剖进一步分离胚胎。 <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="涡虫再生的显微镜图像，突出扁形动物的再生能力。" width="356" height="222" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="图 6"> 图 6 </li>
</ol>

<ol><li>Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).</li>
</ol>

小鼠的着床后阶段发生在受孕后4.5天至出生之间。该解剖方法可基本按照所述方式应用于分离5.5至8.5天受孕后阶段的较早或较晚胚胎。

<table><tbody><tr><td>微型有齿直头解剖镊</td><td>工具</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5130</td><td>2 对</td></tr><tr><td>微型 #55 型不锈钢解剖镊</td><td>工具</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5010</td><td>2 对</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s 磷酸盐缓冲液（1×）</td><td>试剂</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand 无菌聚苯乙烯培养皿</td><td>工具</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>含 4% 多聚甲醛的 PBS 溶液</td><td>试剂</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>直型尖头解剖剪</td><td>工具</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>妊娠雌性小鼠</td><td>动物</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>解剖显微镜</td><td>显微镜</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

6.5 天小鼠胚胎的解剖

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

分析哺乳动物胚胎发育早期阶段的基因表达模式，可为基因功能、细胞间相互作用以及引导胚胎模式形成的信号机制提供重要线索。然而，胚胎着床后不久从小鼠蜕膜中分离胚胎是一项具有挑战性的操作，且目前尚缺乏对此过程的详细分步记录。

本文演示了如何分离植入后（6.5 天）的小鼠胚胎：首先解剖妊娠小鼠的子宫（以检测到阴道栓的当天定为交配后 0.5 天），随后将胚胎从母体蜕膜中分离出来。同时描述了瑞氏膜的解剖操作以及外胎盘锥的去除方法。

分离植入后阶段的胚胎可用于研究胚胎发育过程中的基因表达模式及细胞谱系命运决定过程，但早期胚胎的正确解剖操作具有挑战性。本方案描述了一种分离早期原条阶段胚胎（约交配后6.5天[dpc]）的方法。

哺乳动物胚胎发育早期阶段的基因表达模式分析可为基因功能、细胞间相互作用等提供重要线索……

我叫Kelly Shea，是Nielsen实验室的实验室主管，同时也是一名研究技术员。这项操作非常困难，因为许多人不知道如何区分不同的组织层。因此，你基本上需要逐层剥离所有组织，以暴露下方的胚胎，而此时的胚胎血管化程度很低，非常透明，难以辨认。取用较为钝头的镊子和剪刀。首先，需在动物体中线附近夹住皮肤，并在此处进行第一刀切割。随后，从此处将皮肤向两侧拉开，暴露动物的腹部。你会用镊子提起腹膜的一层薄膜，然后用剪刀将其剪开并向一侧翻开。你需要沿着动物的中线剪开，分离两侧的子宫角，它们在中间部位相连。你可以在其基部直接进行剪切。你可能会同时获得大量脂肪。取下动物的整个子宫角，直接放入 PBS 中。这是在角内的结构。这些是植入位点，1、2、3、4、5。你需要做的就是将它们分开。基本上可以在这里的植入位点之间进行切割。只需从胚胎侧面夹住，将其撬开即可。此时暴露出来的是肛囊，即下方较为疏松的海绵状组织。因此，胚胎应正好位于中央，就在这里。这是乳牙的尖端。您需要将其尖端朝上进行定位。你最终需要从顶端向下约五分之一处进行剪切。胚胎应正好位于此处中央。我通常将其横向放置，用一对镊子夹住，并用另一对镊子固定，剪去其顶端，然后将其分离。因此，一旦移去封口，就将胚胎立于其边缘。如您所见，在移去封口的位置会有一个开口，只需将镊子插入其中即可。是的。此时，胚胎在去壳膜中非常松散。一旦将去壳膜打开，只要从其底部下方伸入，就能相对容易地将其取出。因此，它非常微小。还有一些组织仍附着在胚胎上。你看到的这个位于胚胎顶端的是胚外胎盘锥体，此外还有一些其他组织仍然附着。因此，我只需用移液器将其吸起。此时，你需要固定胚胎。我这里有一个装有PFA的培养皿。我们希望研究候选基因。基本上，我们采用整体RNA原位杂交技术，在胚胎内原位可视化核酸的表达情况。我们特别感兴趣的这些基因，编码的是生殖细胞前体的潜在标记物，并且预测其在小鼠胚胎的特定时间点表达，有助于生殖细胞从潜在的前体细胞发育并成熟为生殖细胞。我们非常感兴趣的一个因子，也是我们首次在这些第6.5天胚胎上进行整体原位杂交检测的因子，是骨形态发生蛋白（BMP4）。它属于TGF-β超家族，对生殖细胞的成熟至关重要，是生殖细胞成熟过程中绝对必需的因子。此外，生殖细胞需要在胚胎内迁移并定位于胚胎原条附近。BMP4 在生殖细胞的信号传导及其成熟过程中均发挥关键作用，这是生殖细胞能够定位于原条所必需的。因此，首先需要明确观察目标，了解其尺寸大小以及操作尺度，并仔细坐下来进行周密规划。该技术尤其取决于所使用的解剖显微镜类型。其中一个技术难点在于操作过程涉及大量精细操作，需要极其稳定的手部动作，以避免损伤胚胎。因此，应选择操作空间充足的解剖显微镜，同时确保实验所需的所有设备都已预先准备就位，从而最大限度减少在解剖过程中不必要的操作。因此，除此之外，我认为你需要非常缓

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

6.5 DPC小鼠胚胎剖析

胚胎生殖细胞在早期发育阶段分化为原始生殖细胞的能力，是研究我们关于癌症与不育假说的理想模型。本方案展示了如何从小鼠交配后10.5至11.5天胚胎的发育性性腺中分离原始生殖细胞。...

小鼠胚胎生殖细胞的分离与获取

感觉传入神经纤维在啮齿类动物脊髓中的刻板投射为研究轴突分支提供了一个易于接触的实验系统，可通过单根轴突的示踪来实现。...

DiI标记背根神经节神经元以研究小鼠胚胎脊髓全组织制备中的轴突分支

本文描述了一种分离胚胎面部外胚层和间充质的方案。我们首先使用Dispase...

小鼠胚胎面部外胚层与中胚层的分离

原代分离的胚胎海马神经元培养物可用于研究神经元死亡过程中涉及的信号传导机制。在分离和解离海马组织之前对胚胎进行性别鉴定，可制备出分别来自雄性和雌性的培养物，从而使研究人员能够识别并研究性别特异性的细胞信号通路。...

用于研究缺血性细胞死亡通路的性别分层神经元培养

脊索中胚层节点和脊索板是发育中的小鼠胚胎中存在的短暂信号调控中心，可通过多种技术进行观察。本文详细描述了用于研究其结构和形态发生过程的两种技术：1）扫描电子显微镜（SEM）；2）整体免疫荧光染色（WMIF）。...

利用扫描电子显微镜和整体免疫荧光技术在原肠形成期小鼠胚胎中观察脊索中胚层与脊索板

我们介绍了利用从心室特异性MLC-2v-tdTomato报告基因敲入小鼠中分离出的胚胎，通过整体封片表层荧光显微镜观察小鼠心脏发育的实验方案。该方法使我们能够直接可视化小鼠心脏发育过程中心室形成的各个阶段，而无需繁琐的组织化学方法。...

利用整体胚胎落射荧光技术分析小鼠胚胎发生过程中的心脏腔室发育

本文提供了一种用于活体成像晚期胚胎期黑腹果蝇（Drosophila）雄性生殖腺的解剖方案。该方案可用于在正常条件下，或经过转基因操作及药物干预后，观察细胞内的动态过程。...

晚期胚胎的解剖与活体成像 果蝇 性腺

本文介绍了用于可视化和分析小鼠胚胎在体轴伸长和体节形成过程中三维和四维图像数据的计算工具与方法，这些图像数据通过整体光学投影断层成像技术、活体成像以及基于多光子显微镜的全胚免疫荧光染色获得。...

三维与四维可视化及分析方法在脊椎动物体轴伸长与分节研究中的应用

传统上，小鼠胚胎瓣膜原基的内皮细胞层通常通过横断面、冠状面或矢状面切片进行分析。我们提出了一种新的方法，可在瓣膜形成区域对内皮细胞层进行en...

En Face 小鼠胚胎心内膜垫平面形态发生分析的制备

本文建立了一种用于制备受精后小鼠胚胎单细胞和细胞核高质量悬液的流程，以进行单细胞和单细胞核测序。...

从上胚层到原肠胚形成结束：突变小鼠全胚胎的单细胞RNA测序

学习6.5天小鼠胚胎解剖技术，用于研究早期胚胎发育中的基因表达模式和细胞谱系决定过程。该方法通过钝镊和剪刀精细分离组织层，成功分离原始条纹期胚胎，为发育生物学研究提供可靠基础。

6.5 天小鼠胚胎的解剖

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