Name: 乳腺上皮移植手术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-10T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: 学习乳腺上皮移植手术，掌握从小鼠采集上皮组织、清除脂肪垫内源上皮及移植外源上皮的技术流程。该方法可用于研究乳腺发育机制及乳腺癌模型构建。

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1. 移植上皮组织的制备
新鲜或冷冻的供体上皮组织均可移植到已清除的脂肪垫中，但预先处理的冷冻供体上皮组织更为方便，且移植效率仅轻微降低（效率 >85%）。冷冻供体上皮组织的制备方案如下：
在制备供体移植上皮之前，先准备好上皮细胞冻存液，并将约1 ml分装至冻存管中。冻存液可在4°C保存长达6个月，直至使用。冻存液包含用HEPES和NaHCO3缓冲的DMEM/F12培养基、10%胎牛血清（FBS）以及10%二甲基亚砜（DMSO）。
从一只刚处死的雌性小鼠中收获乳腺上皮组织。
<ol>
 <li>用70%乙醇冲洗小鼠。</li>
 <li>从耻骨至胸骨沿正中矢状面切开体壁，注意勿刺破腹腔的浆膜。从耻骨处的初始切口向后肢方向分别做斜向切口（图1）。</li>
 <li>剥离体壁以分离浆膜，暴露5th 与体壁腹侧下方筋膜相连的腹股沟乳腺。实现此操作的最佳方法是用弯头镊子的弯曲部分小心夹住浆膜，注意不要刺破腹侧体腔。同时，用直齿镊子夹住皮肤切缘，将体壁从浆膜上拉开。</li>
 <li>在乳腺中识别淋巴结。淋巴结位于乳腺内三条显著血管的交汇处，可在脂肪垫中触摸到一个致密的结节（图2）。用眼科剪的尖端剪除淋巴结周围脂肪组织。用食指从皮肤表皮侧施加压力，使淋巴结从脂肪垫中隆起，再用弯头镊将其夹除。弃去淋巴结。</li>
 <li> 在牵拉皮肤边缘的同时，用弯头镊的弯曲端夹住乳腺脂肪垫，逐渐将其从体壁上剥离。沿脂肪垫走向，向小鼠背部方向分离，完整地取出整块乳腺组织。</li>
 <li>将乳腺置于无菌塑料切块板上。加入少量培养基，约 200 μl，涂抹于腺体表面以保持湿润。使用新的剃须刀片将腺体切成约1 mm的碎块。用镊子将切碎的腺体均分为四份，分别放入含有冻存液的四个冻存管中。将冻存管放入Nalgene“Mr. Frosty”细胞冻存盒中，该冻存盒外层 compartment 加入250 ml异丙醇。将Nalgene冻存盒置于-70°C 在 -80°C 冰箱中冷冻 24 小时。将含有乳腺组织片段的冻存管储存于液氮中，直至需要用于移植。每支冻存管中的乳腺组织片段足以移植至 4 至 8 只受体小鼠的去脂垫中。</li>
</ol>
2. 移植细胞的制备
本实验室已将多种细胞类型移植到小鼠去脂肪垫中，包括永生化的乳腺上皮细胞系、乳腺肿瘤细胞系或原代乳腺细胞。Comma-D 细胞移植前的制备方案如下：
<ol>
 <li>Comma-D 细胞在含有 DMEM:F12 的常规 MECL 培养基中培养，该培养基添加 2% 成年牛血清（ABS）、mEGF、胰岛素和抗生素/抗真菌剂（AB/AM）。</li>
 <li>当细胞融合度达到 85%–90% 时，收集 Comma-D 细胞。</li>
 <li>将细胞悬液在 1200 rpm 条件下离心 5 分钟以收集细胞。用新鲜 MECL 培养基重悬细胞，并将细胞浓度调整至 5 × 106/ml。</li>
</ol>
原代乳腺细胞移植时，需从 小鼠 5 中分离原代乳腺上皮细胞th 通过机械法和酶解法分离乳腺组织中的乳腺细胞。细胞重悬于DMEM:F12培养基中，并调整至所需浓度，通常为5 x 106/ml
3. 小鼠乳腺脂肪垫透明化标准操作流程
<ol>
 <li>麻醉三周龄的宿主小鼠。选择体重相近的小鼠 &lt;12 克，以确保乳腺导管生长尚未启动。我们使用每公斤体重 200 毫克的 2,2,2-三溴乙醇。 </li>
 <li>小鼠麻醉后，将其牢固地固定在手术台上，腹部朝上，四肢伸展，使腹部绷紧。手术前给予镇痛剂，可使用布比卡因（bupivacaine）&lt;1 mg/kg）或丁丙诺啡（0.05 mg/kg），皮下注射。</li>
 <li>用镊子夹住骨盆上方几毫米处的皮肤，并将其从腹部提起。用剪刀剪开皮肤，沿正中矢状面切开体壁，切口从耻骨延伸至胸骨。注意不要刺破腹腔的浆膜。初始切口不要过于靠近尿道，以免伤口夹影响小鼠排尿功能。</li>
 <li>从初始切口开始，沿中线向骨盆两侧分别斜向切开皮肤，延伸至后肢。</li>
 <li>使用弯头镊子的弯曲部分轻轻夹住浆膜。用组织镊夹住皮肤切缘，将体壁从浆膜处拉开，暴露5th 位于体壁腹侧筋膜上的腹股沟乳腺。</li>
 <li>灼烧乳头、淋巴结及通向该淋巴结的两条动脉（图 2）</li>
 <li>分离第四和第五腺体。烧灼第五腺体的边缘，以防止第六腺体的组织向内生长。th 腺体</li>
 <li>用剪刀在淋巴结腹侧（朝向乳头的一侧）横切第四乳腺脂肪垫，将其分离。使用弯头镊子牢固夹住脂肪垫的腹侧部分，并将其完整地从腹壁上剥离。将脂肪垫的腹侧部分夹在两张载玻片之间，放入盛有卡诺氏固定液的玻璃组织染色皿中。该组织后续将用卡红明矾溶液固定并染色，以检查切缘是否干净（图3）。用弯头镊子清理已切除脂肪垫区域周围的筋膜，彻底清除残留的乳腺组织。 </li>
</ol>
4. 清除脂肪垫的替代“保留”术式
在熟练掌握清除小鼠乳腺脂肪垫的标准操作后，研究者可能更倾向于尝试Brill开发的创伤较小的保留式操作 等 (2008)2.
<ol>
 <li>按照标准操作步骤准备小鼠。</li>
 <li>捏住第四对腹股沟乳腺的乳头，用剪刀尖在乳头周围剪出一个直径3-5 mm的环形切口。</li>
 <li>将乳头从身体上拉开，分离已切割的皮肤部分，并通过切口取出第四对腹股沟乳腺。</li>
 <li>识别该淋巴结。使用电灼器对淋巴结及其周围进行电灼处理th 通过孔洞的乳腺组织。</li>
 <li>切下并分离最表层的5th 乳腺组织在靠近淋巴结前的部分，将乳头、环形皮肤区域以及含有上皮组织的乳腺脂肪垫整块切除。 </li>
</ol>
5. 组织/细胞移植
<ol>
 <li>移植上皮组织片段时，将上皮组织的冻存管解冻，并将上皮片段转移至含有新鲜培养基的培养皿中，以稀释DMSO。用剪刀尖在去脂肪组织中制作一个小孔或口袋，用于植入新的上皮组织。用镊子将一块1 mm大小的供体上皮组织放入该口袋中。当撤出镊子时，用组织镊子夹住口袋使其闭合，以确保组织保留在原位。</li>
 <li>移植细胞时，使用50 μl Hamilton注射器和22s规格针头，将50,000个细胞悬浮于10 μl培养基中，注射至每个脂肪垫内。</li>
</ol>
6. 小鼠的处死/复苏
<ol>
 <li>整理皮肤以进行闭合。用镊子夹住对侧的皮肤边缘，将它们合拢，提起并远离腹腔的浆膜，然后用伤口夹闭合。通常情况下，标准操作需要使用两个伤口夹闭合正中矢状切口，每个斜切口各使用一个伤口夹。注意避免阻塞尿道。在正中矢状切口与斜切口交汇处的皮肤间隙，可能需要用缝线进行缝合闭合。简化操作仅需在每侧使用一个伤口夹。</li>
 <li>将小鼠放回笼中，并将笼子置于加热灯下，直至小鼠苏醒。</li>
 <li>伤口夹应在术后两周后拆除。</li>
</ol>
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig1.jpg" alt="大鼠解剖示意图，显示正中切口和斜切口路径，解剖图。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
 图1. 切口模式示意图。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig2.jpg" alt="乳腺手术示意图；腺体切除、烧灼、上皮去除过程。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图2"> 
 图2. 淋巴结、血管、乳头和内源性上皮的位置。在所示位置进行烧灼。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig3.jpg" alt="内源性基因表达；示意图；显微镜分析；组织样本中的细胞解剖结构。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图3"> 
 图3. 整体染色显示，内源性上皮仅局限于圆圈内的区域，因此边缘为“清晰”。
7. 代表性结果
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig1_r.jpg" alt="植物组织显微镜图像，用于植物学研究的细胞结构分析，组织学细节。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 4"> 
 图 4. 3 周龄小鼠去除脂肪垫的完整封片，显示清晰的边缘。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig2_r.jpg" alt="显示细胞壁和细胞器的植物细胞显微镜图像，用于细胞结构研究。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 5"> 
 图 5. 来自一只 10 周龄小鼠的完整组织样本，显示脂肪垫中内源性乳腺上皮已被清除。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig3_r.jpg" alt="脂肪组织的组织学切片；显微图像显示细胞结构和脂质储存。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图6"> 
 图6. 来自一只10周龄小鼠的透明化脂肪垫的苏木精和伊红染色切片。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig4_r.jpg" alt="叶片组织中毛细血管的显微镜图像，维管结构，生物学研究。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图7"> 
 图7. 来自一只10周龄小鼠的完整组织标本，显示由移植上皮发育形成的正常乳腺导管树。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig5_r.jpg" alt="显微镜下脂肪组织和肌纤维的组织学；细胞结构分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图8"> 
 图8. 移植上皮发育的乳腺导管的苏木精和伊红染色切片。
<img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig6_r.jpg" alt="组织学组织切片、显微镜图像、细胞结构分析、病理学研究。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图9"> 
 图9. 移植上皮组织发育出的乳腺肿瘤的苏木精和伊红染色切片。

<ol><li>DeOme, K. B., Faulkin, L. J. Jr, Bern, H. A., Blair, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mammary+tumors+from+hyperplastic+alveolar+nodules+transplanted+into+gland-free+mammary+fat+pads+of+female+C3H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice.</a> Cancer Res. 19, 515-520 (1959).</li>
<li>Brill, B., Boecher, N., Groner, B., Shemanko, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sparing+procedure+to+clear+the+mouse+mammary+fat+pad+of+epithelial+components+for+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A sparing procedure to clear the mouse mammary fat pad of epithelial components for transplantation analysis.</a> Laboratory Animals. 42, 104-110 (2008).</li>
<li>Jerry, D. J., Kittrell, F. S., Kuperwasser, C., Laucirica, R., Dickinson, E. S., Bonilla, P. J., Butel, J. S., Medina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mammary-specific+model+demonstrates+the+role+of+the+p53+tumor+suppressor+gene+in+tumor+development%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">A mammary-specific model demonstrates the role of the p53 tumor suppressor gene in tumor development.</a> Oncogene. 19, 1052-1058 (2000).</li>
<li>Shackleton, M., Vaillant, F., Simpson, K. J., Stingl, J., Smyth, G. K., Asselin-Labat, M. -L., Wu, L., Lindman, G. J., Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439, 84-88 (2006).</li>
<li>Stingl, J., Eirew, P., Ricketson, I., Shackleton, M., Vaillant, F., Choi, D., Li, H. I., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+unique+properties+of+mammary+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells.</a> Nature. 439, 993-997 (2006).</li>
<li>Medina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preneoplastic+Lesions+in+Murine+Mammary+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preneoplastic Lesions in Murine Mammary Cancer.</a> Cancer Res. 36, 2589-2595 (1976).</li>
<li>Wagner, K. -U., Boulanger, C. A., Henry, S. gagias, Hennighausen, M., Smith, G. H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+adjunct+mammary+epithelial+cell+population+in+parous+females%3A+its+role+in+functional+adaptation+and+tissue+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An adjunct mammary epithelial cell population in parous females: its role in functional adaptation and tissue renewal.</a> Development. 129, 1377-1386 (2002).</li>
<li>Dunphy, K. A., Blackburn, A. C., Haoheng, Y., O Connell, L. R., Jerry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+and+progesterone+induce+persistent+increases+in+p53-dependent+apoptosis+and+suppress+mammary+tumors+in+BALB%2Fc-Trp53%2B%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Estrogen and progesterone induce persistent increases in p53-dependent apoptosis and suppress mammary tumors in BALB/c-Trp53+/- mice.</a> Breast Cancer Res. 10 (3), R43-R43 (2008).</li>
</ol>

在本报告中，我们介绍了两种用于清除小鼠乳腺脂肪垫以准备乳腺上皮移植的替代方法。自1959年DeOme 等1建立以来，标准方法一直被沿用。尽管标准方法更具侵入性，但由于能够清晰观察乳腺组织的结构与方向，因此更适合初学者培训。然而，经验丰富的外科操作者可能更倾向于采用保留性手术方法，因其具有多项优势2。最重要的是，保留性手术侵入性更小、耗时更短，且仅需短暂吸入麻醉即可完成，从而缩短了小鼠的恢复时间。此外，该方法还可应用于更年轻的动物（&lt;21天），并能有效清除上皮组织。同时，术后组织粘连减少，若实验需要重复手术切除原发肿瘤并持续长期观察小鼠转移情况，则此优势尤为显著。
该手术的移植部分利用了乳腺完全发育直到青春期后才发生的特性。通过预先切除含有内源性上皮的小部分脂肪垫，可“清除”幼鼠剩余的脂肪垫，从而消除内源性上皮导管树发育的可能性。实验用上皮组织可被移植至受体鼠已清除的脂肪垫中，随后对所形成的外生长结构进行评估，且不会受到内源性宿主上皮的干扰。因此，该方法适用于评估乳腺上皮细胞的发育能力 体内.

乳腺上皮移植操作步骤

Mammary Epithelial Transplant Procedure

本文描述并比较了由DeOme KB开发的脂肪垫清除术 等1 以及 Brill B 开发的保留性手术程序 等2，随后进行乳腺上皮移植操作。乳腺移植技术被乳腺生物学家广泛采用，其原理在于乳腺上皮的显著发育直到青春期后才开始。在3周龄时，乳腺上皮树的生长局限于乳头周围区域，脂肪垫中大部分区域尚无乳腺上皮分布；而到7周龄时，上皮导管树已延伸至整个脂肪垫。因此，若在3周龄时切除含有上皮的脂肪垫小部分区域（即乳头与淋巴结之间的区域），内源性上皮将无法占据乳腺脂肪垫，此时该脂肪垫被称为“清除”状态。在此基础上，可将来自其他来源的乳腺上皮移植至已清除的脂肪垫中，使其具备在脂肪垫内重新建立并延伸乳腺导管树的潜力。该技术已被应用于多种实验模型中，包括在不受到动物整体基因型干扰的情况下，研究转基因乳腺上皮组织中肿瘤表型的表达。3通过有限稀释法移植细胞鉴定乳腺干细胞4,5，确定增生性结节是否会发展为乳腺肿瘤6，并评估先前激素暴露对乳腺上皮细胞行为的影响7,8.
将三周龄的宿主小鼠麻醉、消毒并固定在手术台上。从耻骨到胸骨沿正中矢状位在皮肤上做一纵行切口，但不切开腹膜。从正中矢状切口处沿骨盆向两侧后肢方向做斜向切口。将皮肤从腹膜上分离，暴露第4对腹股沟乳腺。通过去除淋巴结前方的脂肪垫组织清除脂肪垫。将上皮组织碎片或上皮细胞移植至清理后的剩余脂肪垫中，然后缝合小鼠切口。

本文展示了 DeOme KB 等（1959 年）建立的方法以及 Brill B 等（2008 年）改进的方法，用于清除青春期小鼠第四腹股沟乳腺脂肪垫，以为移植乳腺组织片段、乳腺上皮细胞或乳腺肿瘤细胞做准备。

本文描述并比较了DeOme KB等人开发的脂肪垫清除术1与Brill B等人开发的保留术2……

本视频演示了获取记忆的实验操作步骤。分离上皮组织，清除记忆脂肪垫，并将外源性上皮组织移植到三周龄小鼠体内以研究记忆发育过程。在该阶段，记忆上皮树的生长局限于乳头周围区域，而脂肪垫中几乎不含记忆上皮组织。随着小鼠的发育成熟，上皮树逐渐向脂肪垫内延伸生长。到七周龄时，上皮导管树已延伸至整个脂肪垫。若在三周龄时移除含有上皮的小部分脂肪垫，内源性上皮将无法重新占据该脂肪垫，此时该脂肪垫被称为“已清除”，并在成年后仍保持清除状态。然而，移植的供体上皮组织或上皮细胞则具有潜力在已清除的宿主脂肪垫中重新建立并延伸出完整的导管树。脂肪垫。随后可利用组织学方法监测从转基因或实验动物移植的组织中记忆发育的进展。大家好，我叫Joseph Jerry，来自马萨诸塞大学兽医与动物科学系。大家好，我叫 Karen Dunphy。我在 Jerry 实验室工作。今天我们要进行乳腺上皮移植实验。我们采用此方法研究记忆性肿瘤发生的分子与细胞基础，并建立乳腺癌模型。现在开始操作。移植过程的第一步是从供体小鼠中获取记忆性上皮组织。首先用70%乙醇清洗一只刚处死的雌性小鼠，注意不要刺破腹腔的SRU膜。从耻骨到胸骨沿正中矢状面切开皮肤，然后从耻骨处的初始切口向每条后肢方向各做一斜切口。使用弯头镊子夹住SRUs的膜结构，然后使用直齿镊夹住皮肤的切缘，小心地将体壁从S cs膜结构上剥离。为了暴露附着于体壁下侧的第四对腹股沟记忆腺，需在记忆腺内寻找位于三条显著血管交汇处的淋巴结，该淋巴结可在脂肪垫中触诊为一个致密的结节。用眼科剪的尖端剪除淋巴结周围脂肪组织。然后用食指从皮肤表皮侧施加压力，使淋巴结从脂肪垫中隆起，将其夹取分离。用一把弯镊子丢弃淋巴结。现在，在固定皮肤边缘的同时，用弯镊子的弯曲边缘夹住脂肪垫，沿脂肪垫的方向朝小鼠背部逐渐将其从体壁剥离，完整地取出整个脂肪垫。将记忆腺置于无菌塑料切块板上，加入少量培养基，约200 µL，以保持腺体表面湿润。然后用新的剃刀片将腺体切成约1毫米大小的组织块。将切碎的腺体均分为四份。然后使用镊子将冻存液均匀分装至四个冻存管中。将冻存管放入装有250毫升异丙醇的Nalgene细胞冻存盒外室中。随后将该冻存盒置于-70°C环境中保存24小时。24小时后，将冷冻保存的记忆片段小管转移至液氮中，待需要进行移植时取出。每支冻存管中含有足量的记忆腺片段，可用于移植到四至八只宿主小鼠的去脂肪垫中。通过脚趾夹捏法确认三周龄宿主小鼠的麻醉深度后，将小鼠仰卧位牢固固定于手术台上，四肢伸展，使其腹部绷紧。 术前应皮下注射镇痛药布比卡因或丁丙诺啡。使用镊子以酒精和含碘消毒剂清洁手术区域。在骨盆上方几毫米处夹住皮肤，并将其从腹部提起。小心地剪开皮肤，确保最初的切口不要过于靠近尿道，以免伤口夹的放置影响小鼠排尿。接下来，注意不要刺破SRU的膜组织，从耻骨向胸骨方向沿正中矢状面切开皮肤。从最初的切口开始，沿中线向骨盆两侧的后肢方向，斜向切开皮肤。使用弯头镊子轻轻夹住腹壁的塞尔奥斯膜。然后用组织镊子夹住皮肤的切缘，将体壁从塞尔奥斯膜上轻轻拉开。为了暴露第四腹股沟记忆腺，需先辨认第四记忆腺。辨认第五记忆腺，烧灼乳头结节及其通向该结节的两条动脉。分离第四和第五腺体，随后烧灼第五腺体的边缘。接下来，使用剪刀在淋巴结腹侧的脂肪垫处横向剪开，以分离第四乳腺的脂肪垫。用弯头镊子牢固地夹住脂肪垫的腹侧部分，并将其从腹壁拉开。建议将切除的组织夹在两张标记好的载玻片之间，整体压紧，并置于car noise固定液中固定。随后可对组织进行染色、封片，并评估切缘是否干净。用镊子清除脂肪垫切除区域周围残留的所有记忆腺组织。此时，动物已准备好进行组织或细胞移植。可将新鲜或速冻的供体上皮组织移植到已清除的脂肪垫中。此外，也可移植永生化的记忆上皮细胞系、记忆肿瘤细胞系或原代细胞。有关细胞制备的详细信息，请参见随附的上皮组织片段移植书面实验方案。已制备。本视频首先解冻一支上皮组织的冻存管，并将组织碎片转移至含有新鲜培养基的培养皿中。使用剪刀将受体小鼠去脂垫上皮组织剪出一个囊袋，以稀释DMSO。然后用镊子将一毫米大小的供体上皮组织放入该囊袋中。如有必要，用组织镊夹住切口使其闭合，并撤出针镊，以保持组织位置不变。抓住皮肤对侧边缘，用镊子将其对合。 将它们从腹腔的腹侧体膜提起，并用伤口夹闭合。使用两个夹子闭合正中矢状切口，每个斜切口各用一个夹子。如有需要，避免阻塞尿道。使用缝线闭合正中矢状切口与斜切口交汇处的皮肤缺损。将小鼠放回笼中，并将笼子置于加热灯下，直至小鼠苏醒。伤口夹应在两周后移除。以下幻灯片展示了在清除摄食垫并移植上皮后，宿主记忆腺体中可能观察到的代表性图像。此图像显示的是从三周龄小鼠中分离出的内源性记忆上皮。在腺体清除操作中，应注意切割边缘的清晰边界。每次操作后均应制备类似此例的完整组织样本，以评估边界是否已完全清除。此图像显示小鼠在清除处理七周后的透明化脂肪垫。请注意，整个脂肪垫中均无记忆细胞、上皮组织、血红素和黏蛋白。在清除处理七周后对透明化脂肪垫进行染色，也证明腺体中缺乏记忆上皮细胞。展示了一例来自10周龄小鼠的供体记忆上皮移植到清除脂肪垫后的代表性整体标本。请注意，移植的上皮形成了正常的上皮导管树状结构、血色素和腺泡。对清除脂肪垫和记忆上皮的染色。同龄时期的上皮移植显示了外源性上皮正常生成导管结构的能力。此处经透明化处理的脂肪垫经血蛋白和阿辛染色后，显示移植的上皮已发展为记忆性肿瘤。我们刚刚向您展示了如何获取乳腺上皮组织并进行乳腺上皮移植。进行此操作时，重要的是要记住切断第四和第五腺体之间的连接，以烧灼淋巴结和乳头，并彻底清除内源性上皮组织的所有残留。必须确保内源性上皮组织不可能生长进入已清除的脂肪垫。此外，建议对切除的乳腺组织整体进行检查，以确认切缘是否干净。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利成功。

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

乳腺上皮移植手术

在本报告中，我们展示了一种从小鼠乳腺中分离和培养供体细胞的系统，并将这些细胞原位移植到受体小鼠体内，以分析乳腺肿瘤发生过程中间质与上皮之间的相互作用。...

C57BL/6J小鼠乳腺基质细胞与癌细胞移植

采用延时成像技术来评估源自乳腺癌风险转基因小鼠模型的原发性癌前乳腺上皮细胞的行为，以确定特定行为参数与不同基因损伤之间是否存在相关性。...

乳腺癌基因工程小鼠模型来源的原发性癌前乳腺上皮细胞的延时成像

目前尚缺乏用于评估靶向乳腺癌转移的辅助治疗的临床前模型。为解决这一问题，我们建立了一种de...

De Novo 乳腺癌转移的临床前小鼠模型的外科手术操作与方法学

本方案描述了从非贴壁/间充质型乳腺上皮细胞中分离、定量和表征细胞外囊泡（EVs）/外泌体的方法，并介绍了利用这些囊泡将乳腺腺体形成能力转移至管腔型乳腺上皮细胞的技术。来源于具有干细胞样特性的乳腺上皮细胞的EVs/外泌体，能够将此类细胞特性传递给摄取这些EVs/外泌体的细胞。...

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本研究展示了一种评估血管内皮干细胞（VESCs）增殖、分化及成血管潜能的新方法，通过乳腺脂肪垫移植后进行整体组织制备，以实现显微观察。采用谱系示踪策略以研究VESCs的行为 体内...

一种新型乳腺脂肪垫移植技术用于可视化血管内皮干细胞的血管生成

本实验方案旨在介绍一种基于将表达Cre的腺病毒通过导管内注射至小鼠乳腺中来建立乳腺癌模型的新方法。该方法能够以时间可控的方式，在特定细胞类型和器官中特异性调控致癌事件。...

通过向小鼠乳腺导管内注射表达Cre的腺病毒建立乳腺癌模型

本文介绍了一种移植方法，可将供体大鼠乳腺上皮细胞移植至受体动物的肩胛间白色脂肪垫中。该方法可用于研究宿主和/或供体对乳腺上皮发育的影响，且无需预先清除内源细胞，从而扩展了该技术的应用范围。...

大鼠乳腺上皮细胞移植至肩胛间白色脂肪垫

源自患者的异种移植（PDX）模型和可移植的基因工程小鼠模型能够真实地模拟人类疾病，是基础和转化性乳腺癌研究的首选模型。本文描述了一种将乳腺肿瘤组织片段原位移植至乳腺脂肪垫以研究肿瘤生物学特性并评估药物反应的方法。...

原位移植乳腺肿瘤作为乳腺癌的临床前模型

本文所述的活体成像方法利用胶原蛋白的二次谐波生成以及代谢辅因子NAD(P)H的内源性荧光，对未标记的肿瘤微环境进行无创分割，将其划分为肿瘤、间质和血管等区域，从而实现对4D活体成像数据的深入分析。...

一种用于活体成像乳腺肿瘤微环境的无标记分割方法

本文介绍了通过单一腋窝切口进行内窥镜双侧乳头保留乳房切除术并同期行胸大肌前假体重建的详细外科手术步骤。该术式对于乳腺癌患者而言是一种安全且可行的方法。...

经腋窝单一切口内镜双侧乳头保留乳房切除术联合即刻胸大肌前假体重建

本研究报道了一种更简便、省时且经济的方案，可从少量乳腺组织中高效分离和培养原代人乳腺上皮细胞（HMECs）。该方案适用于快速制备原代HMECs，可用于实验室和临床应用。...

原代人乳腺上皮细胞的分离与培养

学习乳腺上皮移植手术，掌握从小鼠采集上皮组织、清除脂肪垫内源上皮及移植外源上皮的技术流程。该方法可用于研究乳腺发育机制及乳腺癌模型构建。

乳腺上皮移植操作步骤

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