小鼠卵母细胞的获取

我叫Amanda dli。我来自加利福尼亚大学欧文分校Paul Verana博士的实验室。今天我将向您展示卵母细胞采集的操作流程。

这需要将输精管从雌性体内分离出来。一旦分离出输精管，我们将通过输精管注入FHM培养基，随后细胞应从子宫中排出。操作完成后，我们将在培养基中分离这些细胞，并将其用于后续实验。

除了分离卵母细胞外，您可能还想通过该程序在特定时间点分离胚胎。您可能希望以视频形式观看该操作的一个原因是，输卵管的不同部分可能非常难以辨认。在本视频中，我将指出漏斗部，即您将注入FHM培养基的位置。

您将使用的解剖工具包括两把尖头镊子和一把尖头剪刀。从雌性个体取出的卵巢管将置于FHM培养基中，该培养基位于一个35毫米的组织培养皿内。卵子将通过连接在1毫升注射器上的30毫米钝头针管吸取，同时使用一把尖头镊子固定uc。

FHM 是一种用于收集细胞的保存液。如果细胞受精，将使用 KSOM 培养基，使其在培养箱中生长。一旦从输卵管中取出卵子和胚胎，我们将使用由毛细管拉制而成的玻璃转移移液管，连接一段软管，通过口吸方式将卵子或胚胎移入保存液中。

使用玻璃凹形培养皿来盛放胚胎和卵子。可将它们分别置于每个凹形圆圈内，使其位于独立且易于识别的位置，便于寻找。将此培养皿放入容器中，即可在不使用油的情况下置于CO2培养箱内。

根据所使用的培养基，在FHM培养基或KSOM培养基上方，将水加入底部，关闭阀门后液体即停留在原位。使用70%乙醇以防止毛发进入操作区域。我们将在腹部区域做一个小切口，并切开腹腔。

我们将扩大切口以暴露腹腔区域。一旦完成切口以暴露子宫，顺便将肠管移开，此时子宫即位于下方。子宫呈Y形，它们剧烈旋转并牵动部分子宫组织。

当切断时，输卵管看起来像意大利面。我将尝试取一部分输卵管。我会取输卵管以及部分被脂肪包裹的卵巢。

另一侧将被处理。此时，再次夹取卵巢或子宫。在这里夹取子宫，在固定点下方进行剪切。此时可找到输卵管。

我将取一部分OV卵巢带回去。然后将其放入培养基中。子宫仍在收缩。

子宫由平滑肌构成，因此即使它已脱离机体，神经元仍会持续放电。此处显示的是子宫。虽然卵巢管看起来像意大利面，且卵巢位于其上方，但实际上卵巢管并未与卵巢相连。

尽管此时我们仅展示了卵巢的一部分，但我的优势手是右手，我用右手持握30号钝端针头。我将该针头用作镊子以分离输卵管。一旦完成分离，我便将钝端针头插入输卵管并注入少量液体，液体将从子宫中流出。

我的左手持握锐利的镊子。该镊子用于分离腓骨并固定所有组织。腓骨呈喇叭状，在此处被分离出来。

我的针尖位于腓骨内，正穿过组织层。好的。为了确保已分离出所有的胚胎和卵子，我喜欢像挤牙膏一样挤压子宫。当你聚焦于脂肪垫时，应寻找那些看起来完全对称的脂肪滴状物。

就在那条长的脂肪下方偏左的位置有一个，那是一个单独的卵。接下来，我将用移液管吸取这个卵，将其放入更多的保存液中，以便我们能够分离出卵本身。

今天我向您展示了如何从雌性生殖道中分离细胞。此外，我还向您介绍了输卵管的不同结构，特别是漏斗部，这是唯一可以注入FHM培养基的结构。

使用30号针头进行操作。通过该技术，我已分离出细胞以及雌性生殖道中存在过的任何胚胎。我可将这些样本用于基因表达研究或转基因实验。