鼠标采用的空气相Electroolfactogram录制的嗅觉感官神经元响应分析

嗅觉上皮制剂被安装在培养皿上并放入加湿的空气流中。在解剖显微镜下，参比电极通过缓冲溶液与组织电连接。将记录电极放置在嗅觉上皮的表面。

嗅觉上皮由计算机控制的气味剂喷吹注入加湿空气流中，将气味剂带到嗅觉上皮。EOG 信号通过放大器和数字化器传输到记录计算机。大家好，我是来自约翰霍普金斯大学生物系卫生 XO 实验室的 Catherine Ciar。

今天，我们将向您展示一个记录小鼠 electro olf facto gram 的程序。我们在实验室中使用该程序来研究嗅觉感觉神经元对气味的反应。那么让我们开始吧。

记录装置由记录电极参比电极、空气输送管、标本台和解剖显微镜组成，所有这些都固定在法拉第笼内的气台上。Microm 机械手用于将电极放置在空气输送管中。连续的气流通过蒸馏水鼓泡以增加湿度，然后通过空气输送管并越过样品。

一个 60 毫米的培养皿装满了 6 到 8 毫米的沙子，以适应标本的安装表面。一口井和一个通道从安装盘的防护装置中挖空。提供一种通过改进的振铃液将参比电极电连接到样品的方法。

记录电极和参比电极连接到放大器。来自放大器的信号被发送到数字化器，然后发送到计算机。XI graph 软件用于控制刺激协议、记录信号并分析反应。

放大器之后连接示波器，以便在放置记录电极时实时监测电位。在 EOG 录制期间。气味刺激的传递由 pico spritzer 控制，该喷雾器在传递气味刺激之前连接到用于信号采集的同一台计算机。

pico spritzer 输出连接到装有液体加臭剂的加臭剂瓶。然后将瓶子连接到空气输送管。现在让我们看看如何准备电极以记录实验。

记录电极是拉制玻璃毛细管中的氯银丝，其中填充有改性的林格溶液。参比电极是氯银丝。通过将银线安装到电极支架中开始准备两个电极。

对于记录电极，应从电极支架的末端伸出 1 到 2 厘米的导线。可以为参比电极留出更多的导线。要添加氯化银涂层，请将导线置于 0.1 摩尔氯化钠中，并将电极支架连接到 1.5 至 9 伏直流电源的正极端子。

电源的负极应与 0.1 摩尔氯化钠溶液电气连接。让反应中的氯化物继续反应 10 分钟，以平衡记录和参比电极之间的任何静电荷。在将它们安装到记录设备上之前，将它们短暂接触在一起。

接下来，使用微量移液器拉拔器拉动玻璃毛细管。毛细管尖端的开口直径应约为 5 至 10 微米。用金刚石笔划线并折断毛细管的钝端，使其比银线长约两厘米。

使用丁烷火炬对切割端进行火抛光，现在在改性林格溶液中熔化 0.5%agros。使用移液管将少量熔融的 agro 溶液拉入电极尖端，使用已加热并拉出具有细长端的注射器。将拉出的毛细管填充约一半。

使用改良的林格溶液，轻轻轻弹毛细管以去除任何气泡。将装满的电极存放在储存罐中，底部加入少量改性的林格溶液，直到准备好使用。准备好组织样本并准备好进行记录后，在准备好电极的情况下，在记录电极线上安装一个装满的毛细管。

让我们看一个记录实验，开始准备用于记录的组织。去除覆盖在牺牲小鼠头骨上的皮肤，并沿中线将头部一分为二，将头部的一半内侧朝上安装在安装皿上。小心地去除隔膜以露出鼻甲。

将装有安装组织的培养皿放在记录台上。对齐载物台，使鼻甲上的记录位置位于显微镜下的中心。现在打开储气罐，以每分钟约 600 毫升的速度将加湿空气输送到鼻甲表面。

放置空气输送管，使其距离录制位置约 10 毫米。将放大器设置为 DC 模式，因为 AC 放大会在 EOG 信号中产生伪影。使用 1 kHz 的低通滤波器和 100 倍的增益进行采集。

现在将记录电极和参比电极安装在微型纵器上。将参比电极放入安装皿上的孔中，并用改良的林格溶液覆盖，使其与组织电连接。小心地将记录电极降低到鼻甲 2 B 或 3 的表面上。

电极应几乎不接触嗅上皮的表面。当电极与上皮接触时，示波器上会出现一条直线基线。现在，将加臭剂瓶连接到计算机上空气输送管的侧端口。

启动刺激方案。数据采集的采样率应为 2 kHz 或更高。该软件将触发气味脉冲并开始记录。

典型的刺激方案可以是 100 毫秒持续时间、单脉冲配对、100 毫秒脉冲，间隔 1 秒或 10 秒持续脉冲。为了尽量减少适应，在提供高气味浓度后，请在方案之间留出 1 到 5 分钟。残留的气味可能残留在管中，用 95% 乙醇清洗空气管并干燥，然后再继续处理其他组织样品。

Axo 移植软件提供了用于测量 EOG 信号关键参数的工具。这些参数包括响应幅度、延迟、达到峰值的时间和终止的时间常数。EOG 的几个参数对于比较小鼠之间的标准化反应特别有用，包括反应幅度、潜伏期上升时间、达到峰值的时间和终止的时间常数。

这里显示的是小鼠对液体乙酸戊酯浓度增加的刺激的反应。顶部的黑线表示气味刺激的时间和持续时间。在这里，我们看到来自五只小鼠误差线的剂量反应关系是 95% 置信区间。

在非常高的气味浓度下，通常会观察到峰值振幅的下降。响应成对脉冲刺激的 EOG 示例显示，气味剂的单个短脉冲会引起持续几秒钟的适应。这里显示的是响应 10 秒持续气味刺激的 EOG。

心电图显示连续出现气味时脱敏。我们刚刚向您展示了如何记录小鼠的电极因子 gram。执行此程序时，请务必记住将电极仅放在上皮表面，不要穿透表面以下的电极。

始终从头部的同一侧进行记录，避免修改设置以尽量减少变化，保持组织湿润，但不收集液滴，解剖后立即将组织置于潮湿的空气中将使组织保持最佳记录状态。就是这样。感谢您的观看，祝您的实验好运。