Name: 长鼻扩展响应（PER）的含量在果蝇 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 40 s
Description: 学习果蝇长鼻扩展响应实验方法，通过饥饿处理优化味觉行为检测。该视频演示了PER实验的关键步骤，包括固定果蝇、制作吸液芯和精确接触技术，帮助研究人员准确评估昆虫味觉偏好。

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感谢 Paul Graham 在视频演示中担任摄像师。

饥饿处理
<ol>
<li>首先，将果蝇进行饥饿处理。</li>
<li>在空的试剂管中放入一小块浸有水的Kim-wipe滤纸。</li>
<li>将20–30只已充分喂食的果蝇转移至该空试剂管中。</li>
<li>每12–24小时检查一次，确保滤纸保持湿润。</li>
<li>对果蝇进行36–72小时的饥饿处理。</li>
</ol>
固定果蝇
<ol>
<li>用吸虫器吸取一只果蝇。</li>
<li>将一个 200 µl 的黄色吸头套在开口处。同时翻转并轻轻吹气，可将果蝇挤入黄色吸头中。</li>
<li>轻轻吹入少量空气，将果蝇推至无法移动的位置。</li>
<li>使用刀片，在果蝇眼睛附近的位置做一标记，然后将果蝇吸回，并剪去吸头尖端。</li>
<li>轻轻将果蝇吹回原位，但在即将到达末端前，在预计喙部所在位置进行斜切。此斜切步骤可省略，但保留将使后续操作更为简便。</li>
</ol>
制备蔗糖灯芯
<ol>
<li>将一条6 mm宽的Kimwipes®纸巾卷成细线，然后撕成若干小段锥形灯芯状碎片（&lt; 1 cm）。</li>
<li>将这些小段灯芯浸入蔗糖溶液或水中，通过接触方式递送至喙器以供取食。</li>
</ol>
准备对照组和实验动物
<ol>
<li>在测试任何味觉刺激物之前，先给果蝇提供4%的蔗糖溶液。这作为阳性对照。若果蝇无反应，则弃用该个体。</li>
<li>接着，测试果蝇对dH2O的反应。这作为阴性对照。若果蝇产生反应，则弃用该个体。</li>
<li>在测试完待测味觉刺激物后，需再次进行上述对照测试。</li>
</ol>

<ol><li>Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).</li>
</ol>

在本演示中，我们已详细介绍吸管伸展反应实验的全部步骤。该方法听起来相当简单，但在许多其他行为学实验中，一些细微因素可能会影响实验的顺利进行。我们已经讨论了需要特别注意的多个步骤。在此，我再次强调其中一些最重要的因素。
其中一个因素是灯芯的形状。我展示了一些非常好的示例，但事实上，实际情况通常介于“非常好”和“非常差”之间，形成一个连续的谱系。刚开始时，你可能使用的灯芯接近“非常好”的一端，但随着时间推移，你的判断标准可能会逐渐向“不那么好”的范围偏移。人类对所谓“好”的感知很容易在无意识中发生改变。防止这种情况的一种方法是，将实验中使用的灯芯拍照，并将所有照片并列比较。或者至少保存一张表现极佳的灯芯照片，在进行PER测试前仔细观察一段时间。
另一个重要方面是接触的冲击程度。这一点较容易处理，因为目标是使接触尽可能轻柔。如果你完全看不到果蝇头部移动，那就是最佳情况。

饥饿条件是最难控制的因素。在许多味觉或嗅觉行为实验中，通常采用24小时的饥饿处理时间。24小时对实...

<table><tbody><tr><td>HDR-HC1</td><td>相机</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SMZ800</td><td>显微镜</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-IBSS</td><td>相机转接器</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DC10LN</td><td>相机转接器</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>257010</td><td>相机转接器</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TREKKER Mk2</td><td>三脚架</td><td>BENBO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gorillapod SLR</td><td>三脚架</td><td>Joby</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMac G5</td><td>计算机</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power Mac G5</td><td>计算机</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>软件</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MPEG Streamclip</td><td>软件</td><td>SQUARED 5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

果蝇喙伸展反应（per）实验

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

喙伸展反应（PER）是一种味觉行为检测方法，已在果蝇和蜜蜂中得到应用。
在果蝇口器（唇瓣）表面，存在称为感器（sensilla）的毛发状结构，其内含有味觉神经元。当有吸引力的物质接触到唇瓣时，果蝇会伸展其喙以摄取该物质。喙伸反应（Proboscis Extension Response, PER）实验用于测量这种味觉行为反应，是研究单只果蝇食物偏好的一种有效方法。多种糖类溶液（如蔗糖、葡萄糖和果糖）对果蝇极具吸引力。通过将厌恶性物质与甜味溶液混合，观察PER反应的减弱，也可检测其抑制效应。尽管基本操作流程较为简单，但许多因素可能导致实验失败。其中一个需要关注的因素是果蝇的反应状态。使果蝇达到合适反应状态所需饥饿时间差异显著，通常在36至72小时之间。我们建立了一系列对照，用于评估果蝇的状态，从而筛选出无反应或过度反应的个体。另一个重要因素是刺激力度以及接触唇瓣的位置，这些难以用语言准确描述。本视频展示了这些内容以及其他多项改进措施，有助于提高该方法的可重复性。

喙伸展反应（proboscis extension response，PER）是一种味觉行为检测方法，已在果蝇和蜜蜂中得到应用。当喙接触到有吸引力的物质时，果蝇会伸展其喙以摄取该物质。不同糖类溶液对果蝇具有很强的吸引力。

果蝇喙伸展反应（PER）实验

Proboscis extension response（PER）是一种味觉行为检测方法，已在果蝇和蜜蜂中得到应用。  
在果蝇口器的表面……

您好。在本演示中，我们将向您展示如何在果蝇中进行喙伸展反应（Probus extension response，PER）检测。喙伸展反应（PER）是一种味觉行为检测方法，已被广泛应用于果蝇和蜜蜂的研究中。当喙接触到具有吸引力的物质时，果蝇会伸展其喙以摄取该物质。各种糖类（如蔗糖、葡萄糖、果糖）的溶液对果蝇极具吸引力。接触果蝇的腿部也可引发伸吻反应（PR），但在本展示中，我们希望重点关注喙部的接触。因此，进行伸吻反应检测的第一步是使果蝇处于饥饿状态。优化饥饿条件是本实验中最关键的因素之一。其中有两个主要因素至关重要：一是饥饿时间，二是果蝇在饥饿前的体型大小。这两者之间似乎存在正相关关系。如果果蝇体型较大且较肥，就需要更长时间的饥饿处理。果蝇的体型取决于培养基的营养状况以及试管中果蝇的密度。让我来展示一个良好的示例。你可以看到，这个小瓶中的果蝇并不拥挤，大约有一百到一百五十只PPE果蝇。因此，一旦果蝇从这里封闭后，应将其继续饲养在新鲜培养基中3至5天，然后转移到一个装有湿润滤纸的空玻璃管中。滤纸需始终保持湿润，饥饿处理时间可为24至96小时。我们稍后将详细说明饥饿时间的设定。以下是进行果蝇PER实验的固定方法。首先，取一只果蝇和一个吸虫器。然后，在吸虫器开口处套上一个200微升的黄色吸头。现在同时进行翻转并朝其吹气。可轻轻挤压使果蝇进入黄色吸头，并施加少量气流，将果蝇推至无法移动的位置。使用刀片，在果蝇眼睛附近做一标记，然后将果蝇吸回，并剪去吸头尖端。接着轻轻吹气，将果蝇吹回原位。但在即将到达末端之前，在准备放置吻部的位置做一个SL切口。可以不进行SL切口，但如果有这一步骤，后续操作会明显更容易。现在，在果蝇下方剪去黄色的尖端，并用黏土填充底部，然后将其直立放置。可以通过在尖端添加更多黏土来进行最终调整。重要的是尽量不要用力过猛地推动钓饵。让我集中在这里，也许再稍微向上推一点。因此，果蝇的头部会略微高于此处。现在这是你在显微镜下观察时的样子，这是从侧面和正面看到的视图。现在你已准备好测试 pr。我们使用的WIC用于传递味道，其制作方法如下：使用Kim擦拭纸，将其通过粉碎机处理，形成如图所示的条状物。该条状物的宽度约为六毫米，大约五到六毫米。现在，你需要将这条带子拧转，形成一根线，要用力拧紧。我正在拧转，这样就形成了一根线，变成像这样的细线。接下来，我们用一对镊子，将这些细小的绒毛从线中拉出、分开。这就是我们如何进行清醒实验。在本视频片段中，我们将演示与果蝇（Pro Bois）接触的正确位置。我们将使用浸泡过4%蔗糖的细线，并通过触碰背腹轴上不同区域来展示其敏感性的差异。腿节的中心位置在这里，这是最敏感的区域。因此，你应该始终尝试以这种方式接触中心位置。当你触碰唇瓣最顶端或背侧区域时，果蝇不会产生反应。因此我们在此处建立了接触，但可以看到果蝇并未伸出ssis。当你

proboscis-extension-response-per-assay-in-drosophila

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科研

JoVE Journal

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生物学

长鼻扩展响应（PER）的含量在果蝇

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一种改进的机械性伤害感受测量实验方法及相关工具 果蝇 幼虫

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用于光遗传学操控神经环路的行为学检测方法 黑腹果蝇

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果蝇喙伸展反应（PER）实验

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