Name: 胚胎干细胞分化成少突胶质前体 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: 学习利用小分子化合物将小鼠胚胎干细胞高效分化为少突胶质前体细胞的方法。该方案可在30天内获得约80%的Olig2+NG2+ OPCs，并通过病毒转导技术制备具有动作电位发放能力的spiking OPCs，为神经疾病治疗研究提供重要细胞模型。

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本工作部分得到了以下机构向 W.D. 提供的资助：美国国立卫生研究院（RO1 NS059043 和 RO1 ES015988）、国家多发性硬化症协会、罗氏贫血研究基金会、费尔德斯坦医学基金会以及儿童神殿医院。
我们感谢 David Pleasure 博士和 Jennifer Plane 提出的建议。我们声明本文不存在任何利益冲突。

由 GFP-Olig2 小鼠胚胎干细胞（mESCs）生成少突胶质前体细胞（OPCs）的详细步骤：
<ol>
 <li>小鼠胚胎干细胞系GFP-Olig2（G-Olig2）购自美国模式培养物集存库（ATCC）。小鼠胚胎干细胞（mESCs）通常每3天传代一次，接种至经辐照的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层上。MEF细胞需至少提前一天接种于0.1%明胶包被的六孔组织培养板中。mESC培养基为添加了20%胎牛血清（GIBCO）、2 mM L-谷氨酰胺、1 mM丙酮酸钠、0.1 mM β-巯基乙醇、1%非必需氨基酸（NEAA）和1,000 U/ml白血病抑制因子的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）（GIBCO）。</li>
 <li>mESC集落经胰蛋白酶消化（TrypLE，5分钟，37°C）为单细胞后，悬浮于含 knockout 血清替代物（KSR）的培养基中，随后以50,000个细胞/cm2的密度接种至Costar超低吸附六孔板（Corning）中。在此条件下，mESCs形成类胚体（EBs）。KSR培养基由-最低必需培养基（-MEM）添加20% KSR、1 mM丙酮酸钠、1% NEAA和0.1 mM β-巯基乙醇组成。</li>
 <li>从第4天至第7天，在KSR或N2培养基中加入维甲酸（RA，0.2 M）和嘌呤霉素（Pur，1 M），如图1A所示。N2培养基为含1× N2补充剂、1 mM丙酮酸钠、1% NEAA和0.1 mM β-巯基乙醇的-MEM。培养基每天更换一次。</li>
 <li>第8天，使用TrypLE（5分钟，37°C）将类胚体（EBs）解离，并接种至0.01%多聚鸟氨酸包被的培养皿中，培养于由N2培养基和成纤维细胞生长因子-2（FGF-2，20 ng/ml）组成的少突前体细胞（OPC）培养基中。培养基每两天更换一次。</li>
 <li>当细胞生长至融合状态时，约每周进行一次胰蛋白酶消化（TrypLE，3分钟，37°C）并重新接种。至第30天，超过80%的细胞呈现GFP/Olig2表达且NG2呈阳性，符合少突前体细胞（OPCs）的特征。</li>
 <li>为生成可产生动作电位的OPCs，使用BacMam Na+通道试剂盒将Nav1.2亚基导入这些由mESC衍生的OPCs中。将BacMam试剂（1 ml，组分A）用PBS稀释至终体积5 ml。然后，在用PBS洗涤前，将混合后的BacMam试剂加入60 mm培养皿中（细胞融合度为50–70%）的mESC来源OPCs培养物中。孵育2小时后，移除混合的BacMam试剂，并更换为添加了1×增强剂的OPC培养基。增强剂为用DMSO（组分C）重悬的组分B。随后，再孵育2小时后，移除含增强剂的培养基，并更换为完全OPC培养基。24小时后对细胞进行检测。</li>
</ol>
代表性结果：
按照图1A所示的分化方案，G-Olig2 mESCs最初悬浮于KSR培养基中培养4天，以形成拟胚体（EB）（图1B）。随后，我们依次用RA和Pur处理这些拟胚体。在第4天时，拟胚体未显示任何GFP荧光，而在第8天（D8）则表现出强烈的GFP荧光（图1B）。在此时间点，将拟胚体用胰蛋白酶消化后接种于添加了生长因子FGF-2的N2培养基中。继续培养22天后（D30），根据流式细胞术结果，GFP阳性细胞的比例达到80.3 ± 0.6%。如图1C所示，GFP阳性细胞与NG2染色信号高度重叠（GFP阳性细胞中有96.4 ± 1.3%为NG2阳性，NG2阳性细胞中有94.8 ± 1.5%为GFP阳性）。因此，这些细胞同时表达GFP/Olig2和NG2，被定义为少突胶质前体细胞（OPCs）。
mESC 分化而来的 OPC（76 个细胞）在去极化时无法产生动作电位（图 2A）。在转导携带 Nav1.2 亚基的杆状病毒后，这些 mESC 分化而来的 OPC 中有 94.1%（17 个细胞中的 16 个）可被归类为能够产生放电的细胞（图 2B）。
<img alt="分化时间线；神经前体细胞培养；体外荧光显微镜分析。" src="/files/ftp_upload/1960/1960fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
 图1. GOlig-mESC向少突胶质前体细胞（OPC）的分化。 （A）示意图显示基于拟胚体（EB）并由小分子驱动的分化流程。在第8天（D8），将EB解离后接种培养。细胞在达到融合状态时每周传代一次。（B）第8天（D8）的EB显示出GFP表达，而第4天（D4）的EB则无此表达。（C）在第30天（D30），NG2免疫染色（红色）的表达与GFP（绿色）表达一致。DAPI（蓝色）用于标记细胞核。比例尺：20 mm。
<img alt="电压钳数据，离子通道活性；显示膜电位在 -60 mV 时变化的图示。" src="/files/ftp_upload/1960/1960fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 2"> 
 图 2. 通过病毒介导的 Nav 通道表达将非放电型 mESC 来源 OPC 转化为放电型 OPC。 （A）膜电位维持在 -60 mV 时，mESC 来源的 OPC 无法产生动作电位，即使细胞去极化至 0 mV 时亦如此。（B）mESC 来源 OPC 在病毒转导后产生动作电位（以红色高亮显示）的一个示例。

<ol><li>Xian, H., Gottlieb, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dividing+Olig2-expressing+progenitor+cells+derived+from+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Dividing Olig2-expressing progenitor cells derived from ES cells.</a> Glia. 47 (1), 88-101 (2004).</li>
<li>Clair, A., Gottlieb, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+ES-cell-derived+neural+cells+marked+by+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A subset of ES-cell-derived neural cells marked by gene targeting.</a> Stem Cells. 21 (1), 41-49 (2003).</li>
<li>Evans, M. J., Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+in+culture+of+pluripotential+cells+from+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos.</a> Nature. 292, 154-156 (1981).</li>
<li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Shin, S., Xue, H., Mattson, M. P., Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stage-dependent+Olig2+expression+in+motor+neurons+and+oligodendrocytes+differentiated+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Stage-dependent Olig2 expression in motor neurons and oligodendrocytes differentiated from embryonic stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16, 131-141 (2007).</li>
<li>Billon, N., Jolicoeur, C., Ying, Q. L., Smith, A., Raff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+timing+of+oligodendrocyte+development+from+genetically+engineered%2C+lineage-selectable+mouse+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Normal timing of oligodendrocyte development from genetically engineered, lineage-selectable mouse ES cells.</a> J Cell Sci. 115, 3657-3665 (2002).</li>
<li>Nishiyama, A., Lin, X. H., Giese, N., Heldin, C. H., Stallcup, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-localization+of+NG2+proteoglycan+and+PDGF+alpha-receptor+on+O2A+progenitor+cells+in+the+developing+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Co-localization of NG2 proteoglycan and PDGF alpha-receptor on O2A progenitor cells in the developing rat brain.</a> J Neurosci Res. 43, 299-314 (1996).</li>
<li>Ligon, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+NG2+neural+progenitor+cells+requires+Olig+gene+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Development of NG2 neural progenitor cells requires Olig gene function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 7853-7858 (2006).</li>
<li>Dawson, M. R., Polito, A., Levine, J. M., Reynolds, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-expressing+glial+progenitor+cells%3A+an+abundant+and+widespread+population+of+cycling+cells+in+the+adult+rat+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NG2-expressing glial progenitor cells: an abundant and widespread population of cycling cells in the adult rat CNS.</a> Mol Cell Neurosci. 24, 476-488 (2003).</li>
<li>Chittajallu, R., Aguirre, A., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-positive+cells+in+the+mouse+white+and+grey+matter+display+distinct+physiological+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">NG2-positive cells in the mouse white and grey matter display distinct physiological properties.</a> J Physiol. 561, 109-122 (2004).</li>
<li>Karadottir, R., Hamilton, N. B., Bakiri, Y., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiking+and+nonspiking+classes+of+oligodendrocyte+precursor+glia+in+CNS+white+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spiking and nonspiking classes of oligodendrocyte precursor glia in CNS white matter.</a> Nat Neurosci. 11, 450-456 (2008).</li>
</ol>

无利益冲突声明。

胚胎干细胞（ESCs）来源于囊胚期胚胎，可分化为生物体的所有细胞谱系 3, 4，提供一个 体外 研究早期哺乳动物发育（包括少突胶质细胞特化）的模型系统。研究表明，在 sonic hedgehog (Shh) 处理下，小鼠胚胎干细胞（mESCs）可分化为少突胶质细胞前体细胞（OPCs） 5此外，Shh诱导的mESCs向OPC的分化保留了胚胎发育过程中观察到的正确时间顺序 6因此，其性质 体外 mESCs 分化为 OPC 的过程被认为与已从研究中获得的认知相一致 体内 发育。在此，我们利用小分子RA和Shh激动剂Pur，成功将G-Olig2 mESCs高效分化为GFP+Olig2+NG2+少突胶质前体细胞（OPCs）。 表达蛋白聚糖NG2的少突胶质前体细胞（OPCs） 7 以及螺旋-环-螺旋转录因子 Olig2 8，可在发育中和成熟的中枢神经系统中生成少突胶质细胞，这些细胞约占中枢神经系统总细胞数的显著比例（约 5%），是主要的增殖性细胞类型 9近二十年来，研究人员已证明 NaV 通道在少突胶质前体细胞的一个亚群中表达，并可在去极化时被激活 10, 11此外，最近一项引人注目的发现9 是在 原位 大鼠中枢神经系统白质中的少突胶质前体细胞（OPCs，约50%）在去极化时可产生动作电位，这取决于电压门控钠（Na⁺）通道的表达情况。V）通道，因此可进一步细分为产生动作电位和不产生动作电位的亚群。然而，这些产生动作电位特性的功能在很大程度上仍不清楚。我们发现，在电生理学特性上，通过Shh依赖性方案分化获得的mESC来源的少突胶质前体细胞（OPCs）与 原位 脑部少突胶质前体细胞。在引入亚基Na之后V1.2，这些沉默的mESC来源的OPC能够产生动作电位。 因此，本文所述的小鼠胚胎干细胞（mESC）来源的可放电与非放电少突胶质前体细胞（OPC）及其分化方案可能有助于：（1）研究可放电与非放电 OPC 之间的功能差异；（2）筛选能够促进 mESC 来源 OPC 中钠通道表达的新因子；（3）开发并优化由人胚胎干细胞（ESC）或诱导性多能干细胞（iPSCs）分化为 OPC 的分化方案。

<table><tbody><tr><td>小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）</td><td>GlobalStem</td><td>GSC-6001G</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Invitrogen</td><td>12604</td><td></td></tr><tr><td>视黄酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-2625</td><td></td></tr><tr><td>Purmorphamine</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009634</td><td></td></tr><tr><td>成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）</td><td>EMD Millipore</td><td>GF003</td><td></td></tr><tr><td>BacMam Na&lt;sub&gt;V&lt;/sub&gt; 1.2</td><td>Invitrogen</td><td>B10341</td><td></td></tr></tbody></table>

胚胎干细胞向少突胶质细胞前体的分化

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞。在脱髓鞘性疾病的再生细胞治疗中，人们迫切希望获得纯化的、已定向分化的少突胶质前体细胞（OPCs）用于移植。OPCs 的特征是表达转录因子 Olig2 并在细胞表面表达蛋白聚糖 NG2。利用 GFP-Olig2（G-Olig2）小鼠胚胎干细胞（mESC）报告细胞系，我们优化了将 mESCs 诱导分化为 GFP+Olig2+NG2+ OPCs 的条件。在本实验方案中，我们首先描述了由 mESCs 生成拟胚体（EBs）的方法；其次，描述了在特定培养条件下，使用小分子物质处理 mESC 来源的拟胚体：（1）视黄酸（RA）和（2）音猬因子（Shh）激动剂嘌呤霉素（Pur），以引导拟胚体向少突胶质细胞谱系分化。通过该方法，可在 30 天内以高效率（&gt;80%）获得 OPCs。本方案中由 mESCs 分化而来的细胞在表型上与来源于原代组织培养的 OPCs 相似。然而，mESC 来源的 OPCs 并不表现出脑内部分 OPC 亚群原位所具有的放电特性。为了研究这一电生理特性，我们描述了通过异位表达 NaV1.2 亚基。通过本方案获得的放电型和非放电型细胞将有助于推进对少突胶质前体细胞（OPC）两个亚群的功能研究。

我们介绍一种基于小分子的方案，用于将小鼠胚胎干细胞分化为少突胶质前体细胞（OPCs）。该方案可在30天内高效地生成Olig2+NG2+的OPCs。我们还描述了一种生成“可放电”OPCs的方法，这类细胞能够产生动作电位。

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞。在脱髓鞘疾病的再生细胞治疗中，存在重要的……

以下实验的总体目标是通过为期30天的一系列培养步骤，从小鼠胚胎干细胞诱导生成少突胶质细胞前体。该过程首先由小鼠胚胎干细胞形成拟胚体，以启动细胞分化；第二步，使用小分子化合物——视黄酸和纯吗啡处理拟胚体，从而诱导细胞定向分化为脊索样细胞。细胞前体。第三步，在额外培养22天后，将类胚胎体解离为单个细胞。在培养中，约80%的细胞为少突胶质前体细胞（OPCs）。接下来，将携带 NAV1.2 亚基的慢病毒转导至由 MESC 分化而来的 OPC 中，以生成具有放电特性的 OPC。通过免疫荧光显微镜和电生理记录获得的结果显示，这些由 MESC 分化而来的 OPC 表达 OPC 标志物并具有放电特性。大家好，我是来自加州大学戴维斯分校细胞生物学与人类解剖学系 Ing 博士实验室的 Pong Chiang。我们同时隶属于加州北部谢林儿童医院。大家好，我是来自邓实验室的 vial Raj。今天我们将向您展示一种将小鼠胚胎干细胞分化为少突胶质细胞前体细胞的实验方法。在我们的实验室中，我们利用该方法研究胚胎干细胞来源的少突胶质前体细胞的特性，以期获得具有更佳治疗潜力的细胞。接下来我们开始。今天将从 OG2 GFP 小鼠胚胎干细胞系中诱导生成少突胶质前体细胞（OPCs）。这些胚胎干细胞需要每三天传代一次，以维持其最佳密度并保持细胞健康，防止发生自发性分化。传代。当 ESS 细胞在层流罩中达到 70% 汇合度时，移除培养基。用 PBS 洗涤，并加入两毫升预热的胰蛋白酶进行消化。在37摄氏度下，使用One x trip LE缓冲液处理细胞5分钟。终止反应，并将细胞重悬于4毫升MES细胞培养基中。将细胞转移至15毫升圆锥形离心管中，在1000 ×g 条件下离心5分钟以收集细胞沉淀。将细胞重悬于MESL培养基中，取十分之一的细胞接种至含有经照射的甲醇饲养层的MES细胞培养基中。三天后，胚胎干细胞（ES细胞）约达到70%融合度，此时可进行传代，或悬浮培养以形成拟胚体，从而诱导分化。用胰蛋白酶消化小鼠ES细胞集落，操作同前，然后将细胞重悬于无血清替代物（knockout serum replacement, KSR）培养基中。使用血细胞计数板对细胞进行计数，并用KSR培养基稀释细胞悬液。将中等浓度的细胞稀释至每毫升15,000个细胞，每孔加入3毫升，接种于超低吸附六孔培养板中。将细胞悬浮液在37摄氏度下培养四天，每两天完全更换一次培养基。从第四天开始，每天更换培养基；在第五天，向KSR中添加0.2微摩尔的视黄酸；在第六天和第七天，同时补充视黄酸和1微摩尔的primor famine。使用含有0.2微摩尔视黄酸和1微摩尔primor famine的两种培养基培养类胚体。培养8天后，大多数类胚体表达GFP，可进行胰蛋白酶消化并像之前一样计数细胞。然后用重悬液将细胞重悬至每毫升3.5 × 10⁵个细胞。在OPC培养基中加入3毫升上述细胞悬液。使用多聚鸟氨酸包被的60毫米培养皿，大约每周传代一次，细胞将生长至融合状态，形态如下所示。按照之前的方法进行传代，使用胰蛋白酶消化3分钟。原始复苏悬浮后第30天。在KSR培养基中，细胞表现出少突胶质前体细胞的特征，可生成有放电活性的少突胶质前体细胞（OPCs）。使用小鼠ESL来源的少突胶质前体细胞，细胞融合度应介于50%至70%之间。用一份 XPBS 更换培养基以洗涤细胞。用于引入电压门控钠通道 1.2 α 亚基。我们使用背部MAM钠通道试剂盒。将一毫升背部MAM组分A与四毫升1×PBS混合。吸除PBS洗涤液，加入稀释后的组分。在37摄氏度下孵育两小时。按照试剂盒说明，用添加了组分B和C的OPC培养基替换原有的培养基。继续在37摄氏度下额外孵育两小时。孵育后，将增强型培养基更换为新鲜的 OPC 培养基。再经过 24 小时培养后，此时可对来源于 ESL 的 OPC 进行放电活性检测。EBS 不显示任何 GFP 荧光。EBS 在原始复苏悬浮后约 30 天表现出强烈的 GFP 表达，此时可进行解离培养。在 KSR 培养基中，大多数细胞对 NG2 染色呈免疫阳性，这与 GFP 表达一致。然而，与脑源性 OPCs 不同，这些由 MES 细胞衍生的 OPCs 即使在细胞去极化至 0 毫伏时也无法产生动作电位。通过病毒转导引入Nav1.2亚基后，这些由MES细胞衍生的少突胶质前体细胞（OPC）会被激活并产生动作电位。我们刚刚向您展示了如何将小鼠胚胎干细胞分化为少突胶质前体细胞（OPC），并通过病毒转导生成可产生电活动的OPC。在进行该操作时，务必注意视黄酸、吗啡和FGF2的正确储存，并始终使用新鲜分装的试剂，使用后应丢弃剩余的视黄酸。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利成功。

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生物学

胚胎干细胞分化成少突胶质前体

本方案概述了从胎儿脊髓中分离胶质限制性前体细胞，并在体外进行培养，用于移植或少突胶质细胞谱系研究。...

从小鼠E13胚胎中分离少突胶质细胞限制性前体细胞

原代人胎儿脑来源的多能性前体细胞增殖 体外...

人胎儿脑来源的前体细胞衍生少突胶质细胞培养体系

本视频演示了从成年小鼠脑组织中分离侧脑室壁并进行酶解组织解离以获得单细胞的详细实验方案。随后，这些细胞在特定培养条件下进行培养，可选择性地促进神经干细胞的增殖，并诱导其分化为少突胶质细胞与星形胶质细胞的共培养体系。...

从成年小鼠神经干细胞获得少突胶质细胞与星形胶质细胞混合培养物

本视频展示了如何从人类胚胎干细胞生成少突胶质细胞前体细胞（OPCs），随后将OPCs成熟为少突胶质细胞。该少突胶质细胞生成过程为改善包括阿尔茨海默病在内的神经退行性疾病的研究与治疗开辟了众多途径。...

将人类胚胎干细胞分化为少突胶质细胞

本视频展示了人源诱导神经元（iNs）与诱导少突胶质前体细胞（iOPCs）共培养体系的建立。将iNs与iOPCs混合后进行共培养，并孵育以促进iNs向神经元、iOPCs向少突胶质细胞的成熟。神经元与其他神经元及少突胶质细胞形成突触连接，而少突胶质细胞则在神经元轴突周围发育出髓鞘结构。...

一种用于模拟神经元-少突胶质细胞相互作用的共培养方法

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞。本方案描述了一种从大鼠大脑皮层分离和培养其前体细胞——少突胶质前体细胞的方法，以及一种快速、可靠的定量评估少突胶质细胞生成的方法 体外...

大鼠少突胶质细胞前体培养物的制备及利用双红外荧光扫描定量少突胶质生成

本方案描述了一种利用改良的拟胚体转单层法从小鼠胚胎干细胞生成皮层中间神经元前体细胞及有丝分裂后中间神经元前体的方法。这些前体细胞可用于 体外...

小鼠胚胎干细胞向皮层中间神经元前体细胞的分化

我们描述了原代小鼠少突胶质细胞的免疫磁珠分离方法，该方法可快速、特异性地分离出细胞用于 体外...

小鼠原代少突胶质细胞的快速特异性免疫磁珠分离

本文介绍了一种人类胚胎干细胞单细胞培养及其后续分化为神经前体细胞的实验方案。该方案操作简便、稳定可靠、可扩展性强，适用于药物筛选和再生医学应用。...

利用人胚胎干细胞单细胞培养实现高效神经分化

由于缺乏足够的工具和方法，神经退行性疾病中神经元与胶质细胞之间的相互作用尚未被充分理解。在此，我们描述了从人多能干细胞获得诱导神经元、少突胶质前体细胞以及少突胶质细胞的优化方案，并举例说明这些方法在理解阿尔茨海默病中细胞类型特异性贡献方面的应用价值。...

由多能干细胞生成人神经元和少突胶质细胞以模拟神经元-少突胶质细胞相互作用

多能干细胞, 神经元, 少突胶质细胞, 细胞分化, 神经发育, 共培养, 神经退行性疾病, 人源细胞模型, 髓鞘形成, 神经胶质生物学

我们描述了由胎儿或成体神经干细胞分化而来的星形胶质细胞与少突胶质前体细胞的混合培养体系，以及体外模拟有害刺激的方法。结合基于细胞的高内涵筛选技术，可构建一个可靠且稳健的药物筛选系统。...

高内涵筛选分析胎儿与成体神经干细胞来源的少突胶质前体细胞培养物的分化与成熟

学习利用小分子化合物将小鼠胚胎干细胞高效分化为少突胶质前体细胞的方法。该方案可在30天内获得约80%的Olig2+NG2+ OPCs，并通过病毒转导技术制备具有动作电位发放能力的spiking OPCs，为神经疾病治疗研究提供重要细胞模型。

胚胎干细胞向少突胶质细胞前体的分化

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