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将处于末期幼虫阶段的自交线虫放入接种了细菌食物来源的培养板中。让幼虫发育至成熟成虫阶段,直至线虫体内及培养板上产生大量虫卵。用缓冲液冲洗培养板,以收集虫卵和线虫。
接下来,用漂白液替换缓冲液,以溶解成虫。由于受到卵壳的保护,胚胎将存活下来,但会处于不同的发育阶段。随后,用缓冲液替换漂白液,让胚胎继续发育。在缺乏食物的情况下,幼虫从卵壳中孵化后,其发育将暂停于第一幼虫阶段。
将幼虫转移到含有食物的培养皿中以恢复发育。这将促进幼虫同步完成后续的发育阶段。
当线虫发育至最后一个幼虫阶段时,将其转移至含有食物和DNA合成抑制剂FUdR的培养皿中,以阻止其产生后代。在FUdR存在条件下继续发育,可获得一群无生育能力的成虫线虫。在本实验中,我们将对线虫 C. elegans 的群体进行同步化处理。
—首先,将所需遗传背景的L4期幼虫转移至含有新鲜接种的大肠杆菌(Escherichia coli)的线虫生长培养基(NGM)平板上。每种菌株至少使用两个100毫米或三个60毫米的平板。
将线虫在适当的生长温度下培养三至四天,直至培养皿中出现大量虫卵和成年雌雄同体线虫。使用约6毫升M9缓冲液冲洗每块100毫米的线虫培养皿,将虫卵和线虫洗下。用玻璃巴斯德吸管将虫卵和线虫分别转移至对应不同品系的15毫升离心管中。以6,180 ×g离心3分钟。
离心后,吸除M9缓冲液,仅保留动物和卵的沉淀。向每根试管中加入三到四毫升漂白液,并间歇性涡旋振荡六分钟。
然后加入 M9 缓冲液补足每管体积,于 6,180 g 离心 1 分钟。吸除上清液,并用 M9 缓冲液重复洗涤三次。
洗涤后,将卵沉淀转移至含有约九毫升 M9 缓冲液的新鲜 15 毫升离心管中。在 20 摄氏度下孵育 16 至 48 小时,通过旋转同步化刚孵化的线虫。
在 6,180 g 条件下离心 1.5 分钟后,将同步化的 L1 动物转移至分别接种了 OP50 的新鲜 NGM 平板上的菌苔中。将平板置于 20 摄氏度培养,直至动物在约 42 小时后发育至 L4 幼虫阶段。此时,使用铂金接种针将 L4 幼虫转移至含有 0.5 毫克/毫升 FUdR 的 OP50 接种 NGM 平板,以防止其产生后代。