乳腺脂肪垫原位注射：建立小鼠乳腺癌模型

首先，在培养中建立所需的小鼠乳腺癌细胞系。手术前一天，剃除小鼠腹部的毛发，并使用脱毛膏去除残留毛发，暴露腹股沟乳头。手术当天，收集细胞，对小鼠进行麻醉，并确认其对脚趾夹捏无反应。用镊子夹住乳头周围的皮肤，形成一个隆起的皮下隧道。

然后，用装有收集细胞的注射器刺穿皮肤。针头应沿皮下隧道推进，直至接近乳头。轻柔地将针尖向上推进至乳头下方的乳腺脂肪垫内。移除镊子，用针头提起皮肤形成帐篷状，然后缓慢注射细胞。

最后，收回注射器，注意不要触碰乳头周围隆起的圆形肿块。注射的细胞及其形成的肿瘤表达荧光素酶，可通过生物发光成像进行追踪。在本示例方案中，我们将展示小鼠原位乳腺癌模型的建立。手术前一天，手动固定受体小鼠，使其腹部朝上，剃除第四对乳头周围的毛发。

用一层薄薄的脱毛膏擦拭小鼠毛发。涂抹30至60秒后，使用蒸馏水清除脱毛膏，并用柔软的纸巾将小鼠擦干。手术当天，在冰上将小鼠乳腺癌细胞悬液用无菌微量离心管稀释至每毫升PBS含2 × 10⁵个细胞的浓度。

每次注射前，用一支配有0.45 × 16针头的1毫升注射器，每只小鼠接种50微升细胞。确认每只麻醉动物对脚趾夹捏无反应。在动物眼睛上涂抹眼膏，并用镊子提起第一只小鼠第四乳头周围的皮肤，形成供注射器穿行的隧道。

手持注射器，使针尖斜面朝上，从乳头处向后5至10毫升位置皮下进针，沿皮下通道推进，直至针尖接近乳头。— 使用镊子轻轻提起第一乳头周围的皮肤，形成可供注射器穿行的皮下隧道。针头应在镊子尖端之间刺入，并顺势向上滑行，避免向下压入组织内。小心将针尖向上推进至乳腺脂肪垫，直至针尖斜面位于乳头下方。

松开皮肤皱褶，使癌细胞缓慢注入。插入后，小心将针尖向上移动至乳腺脂肪垫，直至针尖斜面位于乳头下方，并感受到阻力，以确保细胞被准确输送至目标位置。当所有细胞注射完毕后，将针头轻微转向一侧，然后缓慢拔出注射器。使用棉签对针孔施加压力 10 至 20 秒，以确保无液体渗出。

注射后的乳头应呈现为一个透明的白色扁球体，中心为乳头