Drosophila 幼虫挖掘与穿隧实验：一种评估果蝇幼虫组织缺氧的方法

- 至 设置 向上 的 胚胎 收集 笼具， 使用 葡萄 果汁 琼脂 平板 补充 与 新鲜 酵母 请提供需要翻译的源文本内容。 和 位置 的 平板 到……上 笼具 含有 男性 和 女性 黑腹果蝇 果蝇 的 的 适当的 基因型 该 气味 从 的 酵母 和 葡萄 果汁 是 有吸引力的 和 促进 卵 产卵 由 的 雌性 允许 卵 产卵 用于 a 定时 时期。 然后 移除 的 成虫 和 孵育 的 胚胎 平板 用于 24 小时 到 获得 首先 龄期 幼虫 然后 轻柔地 转移 a 少数 个体 幼虫 从 的 葡萄 果汁 培养皿 到……上 一个 仅含琼脂 测试 培养皿 其中 a 孔 在 的 琼脂 在 的 中心 的 的 培养皿 是 切割 出 和 已填满 与 酵母 粘贴。

年轻 幼虫 必须 喂养 到 增益 身体 重量 到 开发， 因此 他们 洞穴 在 的 食物 来源 的 酵母 粘贴。 作为 他们 开发， 幼虫 进入 a 游走 相 和 隧道 远离 从 的 食物 到 寻找 出 a 位点 用于 化蛹。 为了 评估 缺氧 检查 的 隧穿 模式 幼虫 表格 在 的 底物 缺乏 或 不足 隧穿 是 a 信号 的 氧气 剥夺 在 的 示例 方案 我们 将 见 如何 到 设置 向上 的 掘穴 和 隧穿 检测

- 设置 上 的 对照 和 实验的 遗传学 杂交 在 卵 放置 培养皿 作为 描述 在 的 text 实验方案 保持 的 果蝇 在 黑暗 用于 在 最少 二 天 之前 到 开始 定时 卵 收藏集 对于 定时 卵 收集 转移 的 成虫 到 新 葡萄 琼脂 培养皿 修饰的 与 a 新鲜 涂片 的 酵母 请提供需要翻译的源文本内容。 早期 在 的 天 和 允许 的 成虫 到 放置 卵 开启 的 平板 用于 四 小时 之后 四 小时， 转移 的 成虫 到 新鲜 葡萄 琼脂 平板

接下来， 孵育 的 四小时 收集 培养皿 过夜 在 25 度 摄氏度 由 的 下一步 下午 大多数 的 的 幼虫 将 有 孵化。 方案 到 有 在 最少 50 用于 每个 实验的 组

对于 a 单个 运行 的 的 检测 准备 在 最少 五 检测 平板 每 实验的 组 添加 16 克 的 果蝇 琼脂 在 700 毫升 的 去离子 水 由 加热。 准备 17.5 毫升 尼泊金酯 在 95% 乙醇 热 的 琼脂 溶液 直到 它 是 几乎 完全地 溶解。 然后 添加 尼泊金酯 溶液 到 的 琼脂 溶液 和 热 直到 琼脂 完全地 溶解。 冷却 的 琼脂 溶液 简而言之， 然后 加载 10 厘米 培养皿 与 15 毫升 的 的 琼脂 溶液 一旦 的 琼脂 凝胶， 放置 盖子 开启 的 培养皿 和 让 他们 干燥 在 房间 温度 用于 a 少数 小时 或 过夜。

治愈的 琼脂 必须 是 坚实 到 的 触碰 和 抵抗 碎裂 当 碎片 是 切割 出 的 它。 一旦 的 琼脂 具有 治愈的， 使用 a 1.5 厘米 软木塞 钻孔虫 到 制作 a 中心 孔 在 的 琼脂 凝胶 在 每个 平板 然后 填充 的 孔 整洁地 与 新鲜 酵母 粘贴。

为了 转移 的 幼虫 到 的 检测 培养皿， 制作 a 简单 工具 弯曲 a 曲线 进入 的 尖端 的 a 塑料 微型刮勺 和 浸入 的 尖端 在 酵母 请提供需要翻译的源文本内容。 到 制作 它 粘合剂 到 幼虫 现在 挑选 向上 的 首先 龄期 幼虫 单独地 和 位置 它们 开启 的 琼脂 板 关闭 到 这 食物 土堆 对于 每个 实验的 组， 准备 在 最少 五 培养皿 每个 与 10 幼虫

为了 确保 可重复性 之间 检测 重复组， 它 是 关键的 那 仅 10 幼虫 是 放置 在 每个 检测 平板 是 当然 到 检查 的 检测 培养皿 仔细地 到 确定 那 一 和 仅 一 幼虫 是 转移 每个 时间 你 递送 a 幼虫 与 的 微型刮刀 尖端

一旦 的 培养皿 是 加载的， 标签 它， 覆盖 它， 然后 位置 它 在 黑暗 与 的 盖子 侧面 向上 在 室 温度 检查 每个 培养皿 每日 直到 全部 的 幼虫 有 死亡 或 化蛹。 此处 是 示例 的 平板 用于 a 野生 类型 菌株 从 天 二 通过 天 八 的 的 检测 开启 天 二， 幼虫 是 埋藏的 在 食物 和 无 隧穿 发生。 隧穿 开始 在 天 三 和 达到 a 最大值 之间 天 五 和 八 作为 幼虫 停止 游走 和 化蛹 在 他们的 隧道。

用弯曲的挑针小心地将 蛹 转移至 葡萄培养基平板上 ， 如需 观察 羽化 情况 ， 可 记录 羽化 的 蛹 数量 。 注意 记录 蛹 的形成情况 ， 并 对 蛹 进行 异常 表型 的 评估 。