Drosophila 中食物摄取与偏好检测的毛细管饲喂（CAFE）实验方法

- 为了 准备 用于 的 毛细管 饲养层细胞， 或 CAFE 检测 插入 分级的 或 标记的 玻璃 毛细血管 已填满 与 彩色的， 液体 食物， 底部 结束 首先， 通过 的 移液器 提示 在 顶部 的 a 预组装的 实验的 小瓶 确保 的 毛细血管 是 牢固地 放置 在 的 相同 高度 和 是 不 在 接触 与 的 仪器

Mark 标记 每根 毛细管中 弯月面 的 起始 水平 位置 。 然后 将 小瓶 置于 温度 、 湿度 、 光照 均受控的 环境 中 ， 在整个 实验 期间 进行 培养 ， 并 根据 需要 更换 毛细管 。 在 CAFE 测定 过程中 ， 活动的 果蝇 不受 限制 ， 可 自由 接触 微量移液管 底部 的 开口端 。 果蝇 通过 伸出 口器 并 吸取 液体 来自由 摄食 ， 从而 降低 毛细管内 液体 的 液面 。

为了 在 一段 固定 的 时间 内 追 踪 食物 摄 取 量 及 偏 好 性 ， 记 录 合格 毛 细 管 中 液 面 从 起 始 标 记 下 降 至 该 时 间 段 结 束 时 的 位 置 。在 本 示 例 方 案 中 ， 我 们 将采用经过改良组装方式的 CAFE 分析法，以减少液体填充毛细管中的蒸发。

- 小心移除 堵住 其中一个 外侧 开口的 移液枪 吸头 ，将 一支 装满的 玻璃 毛细管 底部朝前 插入 。通过 将 移液枪 吸头 重新放回 毛细管 旁边 来 固定 毛细管 。对 所有 测试的 食物 溶液 均 重复 此 步骤 。

接下来， 位置 的 毛细管 末端 内部 全部 的 的 小瓶 在 的 相同 水平 3 至 4 厘米 从 的 盖子 离开 一些 距离 之间 的 过滤器 纸 到 防止 的 毛细管 从 泄漏。 使用 a 标记物 笔 到 标签 的 上部 结束 的 的 彩色的 液体 标记 它们 单独地 使用 a 条带 代码 到 确保 的 不同 毛细血管 能 是 已鉴定。

将 制备好的 CAFE 实验装置 放入 一个 带有 网格衬垫 的 塑料 盒 中。 使用 海绵 塞 每 24 小时 添加 100 µL 新鲜 水 以 维持 实验装置 内部 的 湿度 恒定 。 使用 四个 独立 的 小瓶 ， 每瓶 装有 30 mL 双蒸 H2O 作为 湿度 调节 装置 ， 并 将 其 放置 在 塑料 盒 内 CAFE 实验装置 的 旁边。

封面 的 塑料 盒子 到 创建 a 湿度控制的 环境 在……期间 的 实验 转移 的 盒子 到 a 固定 位置 在 a 温度-， 光-， 和 湿度控制的 气候 腔室 用于 的 实验的 时期。 之前 每个 24小时 间隔, 制备 注意 的 的 死亡的 果蝇， 和 使用 的 数量 的 活体 果蝇 到 计算 的 消耗 每 果蝇 用于 的 随后 时期。

在 的 结束 的 的 检测 和 之前 替换 的 毛细管， 保持 的 CAFE 检测 在 的 直立的 位置 做 不 移除 的 盖子 和 标记 的 较低 弯月面 的 的 毛细管 弃去 的 数据 如果 的 标记 结束 是 不 以下 的 初始 标记。 替换 的 使用 毛细血管 与 新鲜的 已填满 毛细血管 用于 长期 实验 每个 24 小时

测量 的 下降 的 的 弯月面 然后 弃去 的 老的 毛细血管 然后 仔细地 移除 的 毛细血管 从 的 检测 和 储存 它们 用于 数据 收集 检查 如果 的 液体 内部 的 毛细管 达到 的 较低 结束。 如果 的 液体 内部 的 毛细管 did 不 达到 的 较低 结束 弃去 的 数据。

之后 的 实验， 拆解 的 设置， 和 洗涤 的 小瓶 盖子， 和 海绵 塞子 在 a 肥皂 浴液 然后 干燥 他们 过夜 在 室 温度 用于 进一步 使用。 重复 实验 与 的 相同 基因型 在 在 最少 三 不同 天。 使用 a 游标卡尺 测量 的 距离 介于 标记起点 和 标记结束 在 的 毛细管 最后， 弃去 的 毛细血管 之后 的 测量