幼虫淋巴腺解剖：分离 Drosophila 血细胞生成器官

- 这 果蝇 黑腹果蝇 幼虫 淋巴 腺体 是 负责任的 用于 的 生产 的 血细胞， 或 血液 细胞 那 循环 在 的 幼虫 血淋巴 为了 识别 的 淋巴 腺体， 首先 找到 的 背侧 血管， 或 心脏， 哪个 泵 血淋巴 贯穿整个过程 的 身体 遵循 的 背侧 血管 朝向 的 头部 直到 你 查找 的 脑 的 淋巴 腺体 是 a 小， 多叶的 结构 下一步 到 的 脑 侧翼 的 背侧 血管

为了 找到 的 初级 叶， 识别 的 最大 叶 的 的 腺体 这 叶 含有 三 区域， 定义的 由 不同 阶段 的 血细胞 发育 的 髓质 区域 最接近的 到 的 背侧 血管 含有 未成熟 血细胞， 而 的 皮层 区域 含有 成熟 血细胞 在 的 后部 结束 的 的 初级 叶， 你 能 找到 的 后部 信号转导 中心 组成 的 专业的 血细胞 的 二级 和 三级 叶 是 较小的 和 做 不 有 定义的 区域。

解剖 淋巴 腺 时，需要 一台 解剖 显微镜、两 把 镊子 用于 操作 幼虫，以及 一 份 缓冲 盐 溶液。

在 本 示例中，将 对 淋巴结 进行 解剖，以 用于 免疫组织化学 分析。

- 为了 开始 淋巴 腺体 解剖 添加 1 毫升 的 1x PBS 到 1 良好 的 a 24孔 培养皿 用于 每个 实验的 设置 到 是 解剖。 然后， 使用 a 一次性 转移 移液器， 添加 1 滴 的 0.1% PBST 至 每个 好。 放置 的 培养皿 扁平 在 冰 放置 a 清洁 解剖 垫 在 一个 被照亮的 体视显微镜 基础。 使用 a 一次性 转移 移液器 到 位置 a 滴 的 0.01% PBST 到……上 的 垫板

转移 a 幼虫 到 的 PBST 滴 用于 解剖 保持 的 熔岩 与 一 对 的 镊子 背侧 侧面 上 大约 1/4 长度 从 的 后部 结束。 随着 的 第二 对 的 镊子 抓取 的 角质层 立即 前侧 到 的 第一 配对 和 轻柔地 拉 的 幼虫 角质层 朝向 的 前部 直到 的 口 钩子 是 暴露。

释放 的 角质层 和 使用 两者 镊子 到 二分 的 幼虫 移除 的 后侧 结束 从 的 PBST 滴 和 弃去。 针 向下 的 角质层 用于 稳定性 和 然后 使用 的 第二 对 的 镊子 到 抓取 的 暴露 口 钩子 和 轻柔地 拉 它们 出。 这 将 分离 的 角质层 从 的 内部 结构

保持 保持 的 的 口 钩子， 仔细地 移除 不需要的 结构 如此 作为 的 唾液 腺体， 脂肪 身体 和 肠道 轻柔地 挑选 向上 的 解剖分离的 组织 复合物 由 的 口 钩子 和 转移 它 到 a 良好 的 的 培养皿 在 冰 重复 的 解剖 与 作为 许多 幼虫 作为 如需要， 但 做 不 超过 a 30分钟 解剖 时间 之前 继续进行 至 的 固定 步骤。

为了 开始 组织 封片， 位置 a 滴 的 封片 缓冲液 到……上 a 玻璃 载玻片 使用 的 口 钩子 作为 a 手柄， 转移 的 淋巴 腺体 到 的 缓冲液 液滴 太空 的 组织 均匀地 铺展 的 封片 缓冲液 在 的 过程。

仔细地 载玻片 一 舌 的 的 镊子 下 的 背侧 血管， 轻柔地 拉取 朝向 的 外周 的 的 封片 缓冲液 到 绘制 出 和 压平 的 淋巴 腺体 随着 a 锯切 运动 切 的 背侧 血管 之间 的 淋巴 腺体 和 的 脑 移动 的 休息 的 的 组织 远离 从 的 淋巴 腺体 到 的 最外层 边缘 的 的 缓冲液

取 a 清洁 盖子 滑动 和 仔细地 较低 它 到……上 的 封片 缓冲液 的 载玻片 是 现在 准备就绪 用于 成像 或 能 是 储存的 在 4 度 摄氏度 直到 需要。