计数殖民地形成单位（CF）：从飞体中量化细菌

- 首先， 收集 果蝇 在 的 期望的 阶段 的 发育 和 位置 他们 在 a 无菌的 管 为了 计数 仅 的 内部 微生物群 灭菌 的 外部 的 的 果蝇 由 浸没 它们 在 70% 乙醇 至 测量 两者 的 内部 和 外部 微生物群 跳过 这 灭菌 步骤。 接下来， 研磨 向上 的 果蝇 在 a 小 体积 的 细菌 生长 培养基 使用 陶瓷 珠粒 和 a 组织 匀浆器， 或 手动地 与 a 研钵杵 护理 应该 是 采集 不 到 引入 细菌 从 外部 来源， 到 防止 污染的 的 样本。

您 应该 现在 有 a 均一的 混合物 含有 细菌 那 你 能 培养。 带入 向上 的 体积 的 的 匀浆液 使用 液体 细菌 培养基 执行 连续的 稀释液 的 的 匀浆液 和 培养皿 a 恒定的 体积 的 这些 稀释液 开启 的 适当的 固体 生长 培养基 用于 你的 细菌 作为 的 细菌 生长， 菌落 将 表格 开启 的 平板 查找 的 稀释 那 具有 a 范围 的 10 到 100 菌落 到 确定 的 菌落 形成 单位， 或 菌落形成单位， 的 的 样品

在 本 示例 方案中，我们 将 用 无菌 果蝇 接种 一种 已知菌群 或 定义明确的 细菌 培养物，并 收集 和 测定 CFU。

- 使用 过滤器 提示 到 转移 100 微升 的 过夜 生长 到 a 无菌的 微型离心机 管 接下来， 转移 200 微升 的 每个 培养 至 a 96孔 平板 移除 的 样本 从 的 生物安全 柜子 和 离心机 他们 到 沉淀物 的 细菌 之后 制作 一、 二、 和 四倍 稀释液， 测量 的 光学 密度 或 OD600 开启 a 多孔 培养皿 读取 分光光度计

之后 获取 的 OD600 移除 的 上清液 与 a 移液器 尖端 和 使用 新鲜 mMRS 到 重悬 的 沉淀物 混合 的 稀释的 细菌 菌株 在 相等 比率 到 创建 a 多物种 鸡尾酒 转移 50 微升 的 的 鸡尾酒 到 的 圆锥形的 管 含有 的 无菌的 饮食 和 去卵膜的 卵 是 确定 到 添加 的 细菌 之后 的 卵 转移 到 防止 污染 之间 小瓶 然后 位置 的 接种 管 在 一个 培养箱

为了 测量 的 菌落 形成 单位 或 菌落形成单位， 转移 五 果蝇 到 a 1.7 毫升 微型离心机 管 含有 125 微升 的 陶瓷 珠粒 和 125 微升 的 mMRS 肉汤 匀浆化 的 果蝇 使用 a 组织 匀浆器 有 应该 是 无 整个 片 的 果蝇 剩余。 接下来， 稀释 的 匀浆液 与 875 微升 的 mMRS, 涡旋混合 的 匀浆液 用于 五 秒, 和 移液器 120 微升 进入 的 首先 良好 的 a 微量滴定板 平板

移除 10 微升 从 的 首先 良好 和 添加 它 到 的 第二 良好 含有 70 微升 的 MRS. 混合 的 目录 的 的 第二 良好 彻底地。 然后 转移 10 微升 从 的 第二 良好 到 的 第三 良好 含有 70 微升 的 MRS, 和 混合 彻底地。 转移 10 微升 的 每个 稀释 到 一个 mMRS 平板 轻微地 倾斜 的 培养皿 到 铺展 的 稀释 若干 毫米 向下 的 琼脂的 表面 和 允许 的 液体 至 干燥 之前 移动 的 平板 移除 的 培养皿 从 的 培养箱 一次 不同的 个体 菌落 是 可见的 和 计数 它们 从 a 稀释 与 10 到 100 分离的 菌落。 最后， 计算 的 菌落形成单位 每 果蝇