固定样品的制备 果蝇 用于免疫染色的卵母细胞：一种高效固定并去除外膜的方法

- 开始 由 脉冲 麻醉的 果蝇 沿 与 缓冲液 在 a 搅拌器 到 中断 向上 果蝇 进入 小 片段 过滤 的 混合物 通过 a 网孔 到 移除 的 大 身体 部分 然后， 允许 的 卵 到 水槽 而 的 较大 片段 保持 开启 的 表面 和 能够 是 已移除。

重复 这 过程 使用 a 较小 网孔 到 移除 附加的 碎片 收集 的 卵 在 a 小瓶 和 如果 的 卵 是 到 是 处理 与 a 药物 做 因此 在 这 点 接下来， 移除 的 液体 和 替换 它 与 固定剂 添加 庚烷 到 帮助 的 固定剂 穿透 的 膜 周围 的 卵

然后， 洗涤 远离 的 固定剂 与 PBS 至 染色 的 卵母细胞， 移除 的 保护性的 外侧 膜 到 允许 用于 抗体 穿透 移液器 的 卵母细胞 到……上 的 霜状 部分 的 a 玻璃 载玻片 放置 a 盖玻片 结束 的 卵 和 轻柔地 滚动 的 盖玻片 在 a 来回 运动 到 机械地 分离 的 绒毛膜 和 卵黄 膜 从 的 卵 的 卵母细胞 是 现在 准备就绪 至 是 染色。

在 示例 实验方案中， 我们 将 制备 处于 第一次减数分裂 的 卵母细胞 I 期 以 染色 并 观察 纺锤体 结构。

- 至 开始， 预切 的 内部 的 a 5毫升 管 和 巴斯德 移液器 与 PTB 到 防止 卵母细胞 粘附 到 的 表面。 添加 100 毫升 的 罗布的 缓冲液 到 a 搅拌器 和 然后 添加 100 到 300 麻醉的 果蝇 和 脉冲 三 次 用于 一 第二。

过滤 的 结果 浆料 进入 a 250毫升 烧杯 通过 a 大 网孔 与 孔隙 的 周围 1500 微米。 让 的 滤液 沉降 用于 左右 二 分钟 和 然后 吸出 的 顶部 层， 去除 作为 许多 大 身体 部件 作为 尽可能。 过滤器 的 泥浆 再次 进入 a 250毫升 烧杯 通过 a 较小的 网孔 与 的 孔 大小 的 300 微米。

冲洗 的 第一 烧杯 使用 额外的 缓冲液 在 的 包被 移液器 到 收集 的 剩余 卵母细胞 让 的 浆料 沉降 用于 三 分钟 和 然后 吸出 全部 但 的 底部 10 毫升 倒入 作为 大量 的 的 10 毫升 作为 可能 进入 的 包被 5毫升 管 让 的 浆液 沉淀 用于 左右 二 分钟 和 然后 仔细地 移除 的 液体

添加 的 剩余部分 的 的 10 毫升 的 泥浆 和 让 的 混合 沉淀 再次 之前 去除 的 液体 冲洗 任何 剩余 卵母细胞 出 的 的 烧杯 使用 额外的 缓冲液 在 的 包被的 移液器 让 的 冲洗 沉淀 在 的 5毫升 管 用于 三 到 五 分钟

至 修复 的 卵巢， 首先， 吸出 关闭 全部 液体 从 的 组织， 和 立即 添加 1 毫升 的 修复 混合。 放置 的 组织 在 a 旋转器 用于 二 和 一半 分钟 接下来， 添加 1 毫升 的 庚烷， 涡旋 的 管 用于 一 分钟 和 然后 允许 的 卵母细胞 到 沉淀 用于 a 进一步 分钟。

移除 全部 液体 从 的 沉降 组织， 然后 添加 1 毫升 的 1x PBS 涡旋 的 管 用于 30 秒, 和 然后 允许 的 卵母细胞 至 沉淀 用于 一 分钟。 之后 ， 移除 全部 液体 从 的 管 和 填充 它 与 五 毫升 的 1x PBS

使用 的 包被 移液器， 添加 大致 500 到 1,000 卵母细胞 到 a 霜状 玻璃 载玻片 移除 任何 无关的 身体 部分 或 材料 使用 镊子 放置 a 盖玻片 在 顶部 的 的 组织， 和 轻柔地 滚动 的 卵母细胞 直到 全部 膜 是 已移除。 拖动 的 边缘 的 的 盖玻片 跨越 的 卵母细胞 作品 好。 检查 的 进展 的 膜 去除 在……下方 a 显微镜 定期地。 太 大量 压力 将 破坏 的 卵母细胞