Drosophila 晚期蛹间接飞行肌（IFM）解剖：一种高通量组织采集方法

- 在 的 成年 果蝇， 的 间接的 飞行 肌肉, 或 IFMs， 是 的 果蝇的 最大 肌肉 跨越 的 整个 胸部 的 IFMs 协调 的 特征 高 频率 翅 运动 在 双翅目 果蝇， 包括 果蝇 二 相对的 肌肉 纤维 组 包含 的 IFMs。

首先， 的 背侧 纵向的 肌肉, 或 DLMs 是 位于 沿 的 中位数 平面 的 的 胸部 上方 的 肠道 和 跨度 从 前部 到 后部 第二， 的 背侧 腹侧 肌肉， 或 DVMs, 跨距 从 的 顶部 至 的 底部 的 的 胸部 和 是 两侧 flank 由 的 TDT, 或 跳跃 肌肉 两者 肌肉 组 是 已附上 到 的 角质层

由 关于 48 小时 之后 蛹壳 形成 或 APF, 成熟 IFMs 可以 是 视觉上 已鉴定 与 a 简单 解剖 显微镜 在 的 示例 方案， 我们 将 收集 IFMs 从 蛹 年长的 比 48 小时 APF 用于 高 通量 分析。

- 对于 IFM 解剖 之后 48 小时 APF, 使用 a 轻轻 湿润的 涂料 刷子 到 转移 的 分期的 蛹 到……上 a 条带 的 双面的 黏性 胶带 固定的 在 a 显微镜 载玻片 定向 的 蛹 在 a 线， 腹侧 侧面 下调 和 前部 朝向 的 底部 的 的 载玻片 当 全部 的 的 蛹 有 已 放置， 使用 镊子 至 解剖分离 分开 和 开放 的 首先 蛹期 情况 上方 的 前部 气门， 和 轻柔地 载玻片 a 配对 的 镊子 背侧 朝向 的 后部， 切割 的 蛹期 案例 作为 的 镊子 移动。

免费 的 蛹 从 的 打开 情况 和 立即 转移 的 蛹 至 a 滴 的 PBS 开启 a 第二 显微镜 载玻片 当 全部 的 的 蛹 是 释放 使用 精细 剪刀 到 切割 的 腹部 的 的 蛹 远离 从 的 胸部 和 推 的 腹部 进入 a 分离 桩 当 全部 的 的 胸部 有 已经 已移除， 使用 a 块 的 组织 纸 到 移除 的 大多数 的 的 PBS 和 的 桩 的 腹部

添加 a 滴 的 新鲜 预冷的 PBS 到 的 剩余 胸部 之前 使用 的 剪刀 到 切割 从 的 头部 沿着 的 纵向的 身体 轴 在 a 单个 运动 到 分割 的 胸部 在 一半 当 全部 的 的 蛹 有 已 解剖， 使用 的 数量 五 镊子 到 选择 一 的 的 半切术 和 轻柔地 插入 的 提示 的 一 镊子 上方 和 以下 的 中部 的 的 IFMs。

持握 的 第一 配对 的 镊子 仍 使用 精细 剪刀 到 切 一 结束 的 的 IFM 远离 来自 的 角质层 和 肌腱 之前 旋转 的 蛹 180 度 到 允许 的 其他 结束 的 的 IFM 到 是 切割 自由 从 的 角质层 和 肌腱 使用 镊子 到 转移 的 IFM 束 从 的 胸部 到 的 边缘 的 的 PBS 气泡 使用 水 张力 到 保持 的 束 在 位置。

然后， 推 的 尸体 到 的 相反 侧面 的 的 载玻片 和 解剖 的 休息 的 的 IFMs 在 的 相同 方式。 当 全部 的 的 IFMs 有 已经 收集 使用 的 数量 五 镊子 到 移除 任何 跳跃 肌肉 或 角质层 片段 那 可能 有 发现 他们的 方法 进入 的 样本。 然后， 使用 水 张力 到 轻柔地 捕获 的 解剖分离的 IFMs 之间 a 对 的 镊子 和 位置 的 IFMs 在 a 1.5 毫升 微型离心机 管 含有 250 微升 的 预冷的 PBS