Drosophila 体内 钙成像：神经元活动功能成像的一种方法

- 至 执行 在 体内 钙 成像 在 的 果蝇 神经系统 系统， 目标 的 表达 的 a 遗传学上 编码的 钙 指示剂, 如此 作为 GCaMP, 到 的 神经元 的 兴趣。 当 神经元 火 一个 动作 电位, 快速 去极化 的 的 膜 导致 电压门控 钙 通道 到 开放， 领先 到 一个 内流 的 细胞外 钙 进入 的 细胞

GCaMP 是 a 融合 蛋白 在 哪个 增强的 绿色 荧光的 蛋白 或 EGFP, 是 修饰的 和 融合的 到 的 M13 片段 的 的 肌球蛋白 光 链 在 的 N-末端， 以及到 的 钙结合 蛋白 钙调蛋白， 在 的 C端 钙 结合 到 钙调蛋白 触发因素 构象 变化 在 GCaMP, 导致 一个 增加 在 的 蛋白的 荧光

为了 图像 变化 在 GCaMP 荧光 作为 a 代理 用于 神经元的 活性 在 体内 暴露 的 区域 的 的 神经的 系统 与 预期的 活性 然后， 使用 a 荧光的 显微镜 那 能 捕获 GCaMP 动力学 和 是 配备 与 a 刺激 递送 设置 递送 的 刺激， 用于 例如， 一个 气味， 而 记录 GCaMP 荧光 在 响应 神经元

在 的 示例 方案 我们 将 参见 GCaMP 功能的 成像 是 使用 到 可视化 反应 在 的 大脑的 蘑菇 细胞器 在……期间 嗅觉 关联的 学习

- 对于 可视化 的 的 基于GFP的 钙 指示剂, 调节 的 激光 的 a 多光子 显微镜 配备 与 一个 红外 激光 和 a 水 浸润 目标， 已安装 开启 a 振动 分离的 表格， 至 一个 激发 波长 的 920 纳米 和 安装 a GFP 带通 过滤器 使用 的 粗糙的 Z 调整 旋钮， 扫描 通过 的 z轴 的 的 脑 到 定位 的 脑 区域 的 兴趣。 使用 的 裁剪 功能 到 焦点 的 扫描 在 仅 的 面积 的 兴趣 到 最小化 扫描 时间 和 旋转 的 扫描 查看 如此 那 的 前部 的 的 头部 是 面对 向下 然后， 调节 的 帧 大小 到 512 由 512 像素 和 选择 的 区域 到 是 扫描， 进行 进入 账户 的 计算得出的 扫描 时间 用于 每个 帧 到 实现 a 帧 速率 的 在 最少 4 赫兹

对于 气味诱发的 钙 瞬时的 可视化 启动 a 预编程 大体的 包装 有能力的 的 连接 的 图像 获取 软件 和 的 气味 递送 程序 和 开始 的 测量 在 的 显微镜 软件 用于 6.25 秒 到 建立 一个 F0 基线 值 在 的 气味 递送 系统， 递送 a 2.5 第二 气味 刺激， 指示的 此处 由 照明 的 LED， 触发的 由 的 开启 和 关闭 的 特异性 气味 杯 瓣膜, 随后 由 12.5 秒 的 记录 在 的 结束 的 的 气味 偏移量 然后， 重复 的 递送 用于 a 第二 和 第三 气味分子 在 的 相同 方式

至 执行 关联的 预处理 在 这 设置， 使用 的 计算机控制的 气味 递送 系统 到 当前 的 条件化 刺激 加 气味 用于 60 秒， 与 12 90伏特 电 电击。 之后 a 60 第二 断裂 呈现 的 条件 刺激 负 气味 单独地 用于 60 秒 无 电 休克 测量 的 训练后 气味诱发的 钙 瞬时表达 再次 由 重复 的 预训练 气味 刺激 实验方案 3 分钟 之后 完成 的 培训 相 然后， 保存 的 成像 文件 在 一个 适当的 格式 用于 之后 图像 分析。