线虫冻裂法：一种暴露线虫内部组织以进行染色的方法

- 转移 洗涤 C. e秀丽隐杆线虫 在 液体 到 a 玻璃 载玻片 此前 包被的 与 多聚赖氨酸， a 化合物 那 将 帮助 蠕虫 角质层 棒状物 到 的 玻璃 表面 轻柔地 按压 另一个 玻璃 载玻片 直的 向下 与 一个 边缘 悬垂的 的 底部 载玻片 至 固定 的 线虫 无 损伤， 压缩 的 动物 避免 任何 侧向 运动。 然后， 位置 的 玻璃 载玻片 与 夹层式 线虫 在 a 金属 阻断 内部 一个 绝缘的 实验室 容器 已填满 与 a 冷冻 试剂， 如此 作为 液体 氮 或 干燥 冰

金属 是 一个 有效的 温度 导体 确保 的 阻断 表面 是 冷 足够 到 迅速地 冷冻 的 蠕虫的 角质层 到 两者 玻璃 表面。 一旦 冷冻的， 迅速地 分离 的 玻璃 载玻片 至 拉 分开 或 裂纹 开放 的 蠕虫 角质层 继续 与 组织 固定 和 染色 作为 破坏 的 的 低 通透性 角质层 允许 化学 固定剂 和 染色 抗体 至 获取 的 内部 蠕虫 组织 在 的 随后 方案 我们 将 见 a 详细 演示 的 的 冷冻-破裂 技术 和 组织 固定

首先， 准备 a 载玻片 到 固定 的 蠕虫。 移液器 30 微升 的 poly-L-lysine 到……上 a 载玻片，一个nd 然后， 设置 a 第二 载玻片 到……上 的 其他 和 揉搓 它们 一起 到 铺展 的 溶液 均匀地 到……上 两者。 现在， 去皮 分开 的 二 载玻片 和 让 他们 空气 干燥 用于 30 分钟

接下来， 位置 a 平的 金属 阻断 进入 a 容器 已填满 与 液体 氮 洗涤 的 培养皿 与 M9 溶液 和 转移 关于 10 微升 的 M9 含有 的 线虫。 或者， 挑选 的 线虫 和 添加 M9 到 的 载玻片

一旦 的 线虫 是 转移， 轻柔地 滴 a 盖玻片 交叉方向 到……上 他们 如此 那 的 盖玻片 突出端 一 边缘 然后， 轻柔地 按压 的 盖玻片 无 制作 任何 侧向 运动。

现在， 立即 转移 的 载玻片 到 的 金属 阻断 在 液体 氮 和 让 它 冷冻 之后 五 分钟 轻弹 关闭 的 盖玻片 使用 的 悬垂的 边缘 做 这 迅速地 到 获取 的 适当的 裂纹 的 的 角质层

接下来， 浸入 的 载玻片 在 a 甲醇-已填满 玻璃 科普林 罐 在 负 20 度 摄氏度 之后 五 分钟 转移 的 载玻片 到 一个 丙酮-已填满 玻璃 科普林 罐子 用于 另一个 五 分钟 在 的 相同 温度 的 载玻片 能 是 染色 直接地 或 储存的 在 负 20 度 摄氏度