C. 埃莱甘斯 戈纳德挤压:快速解剖技术

0 次观看2:59 分钟 • April 30th, 2023

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- 在含有 M9 缓冲液的试管中,收集多达 150 个处于所需发育阶段的雌雄同体蠕虫。通过用 M9 缓冲液洗涤并离心样品来去除蠕虫中的细菌。

去除上清液时,在解剖显微镜下观察试管,以防止样品损失。将蠕虫转移到具有最小体积 M9 缓冲液的玻璃皿中。添加左旋咪唑以麻醉蠕虫。

找到蠕虫的头部和咽部或前肠,其中包含两个球状结构。用两根针切开咽部后面的蠕虫。确保快速完成解剖,以免影响组织。

一旦角质层被破坏,由于蠕虫的内部压力,两个性腺臂就会被挤出或推出体外。

在这个例子中,我们将解剖成虫的性腺进行免疫荧光分析。

- 挑选 100 至 150 条处于所需发育阶段的蠕虫,并将它们收集在含有 100 微升 M9 缓冲液的 1.5 毫升微量离心管中。然后,在微量离心管中再加入 900 微升 M9 缓冲液,并在室温下以 1,000 次 g 离心 1 分钟。

在解剖显微镜下,轻轻去除 900 微升 M9 缓冲液。然后,再重复洗涤两次以去除大部分附着的细菌。

接下来,使用带有加宽孔径的 200 微升微量移液器吸头,将 100 微升 M9 缓冲液中的蠕虫转移到平底玻璃表皿中。然后,向培养皿中加入 1 至 3 微升 0.1 摩尔左旋咪唑,轻轻旋转。现在,将两个 25 号针头连接到两个注射器上,为每只手制作一个解剖工具。

在解剖显微镜下,将每根针放在每条蠕虫的下方和上方,并使用剪刀状运动在第二咽球附近的每条蠕虫上进行精细切割。在 5 分钟内至少切掉所有动物一次,以使左旋咪唑保持有效。

- 在五分钟内完成对培养皿中动物的解剖非常重要。

- 如果看不到突出的性腺,只需跳过该动物即可。在这里可以看到适当的挤压性腺。

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最后更新:1 八月 2026