RNAi 铺板用于秀丽隐杆线虫（C. elegans）饲喂：一种在大肠杆菌（E. coli）中诱导靶向 dsRNA 表达的技术

- 在 C. elegans 中，可通过喂食表达来自重组 DNA 质粒的双链 RNA（dsRNA）的细菌来诱导 RNAi 可 被 诱导 由 喂食 蠕虫 细菌 来实现，这些细菌 表达 双链 RNA 或 dsRNA 来自 一个 重组 DNA 质粒。

至 开始， 培养 四环素耐药 HT115 E. coli 转染 与 L4440 质粒 过夜 在 选择性 LB 琼脂 平板 含有 四环素 和 氨苄青霉素, 或 它的 功能的 模拟 羧苄青霉素 在 添加 到 的 目标 DNA 的 质粒 含有 a 基因 用于 氨苄青霉素 电阻 仅 细菌 菌落 那 遗传 的 质粒 能 培养 在 的 存在 的 这些 抗生素

接下来， 收获 细菌 菌落 和 展开 他们 在 液体 LB 培养基 到 的 期望的 浓度 至 诱导 dsRNA 表达 转移 的 细菌 溶液 到……上 制备 线虫 生长 培养基 或 NGM, 琼脂 平板 含有 IPTG

在 这 表达 系统， IPTG 模拟物 乳糖 至 灭活 的 lac 阻遏蛋白 使能够 的 表达 的 T7 RNA 聚合酶 开启 的 质粒 目标 DNA 表达 是 受调控的 由 二 会聚的 T7 启动子 因此， 感觉 和 反义 序列 是 转录的 领先 到 的 表达 的 dsRNA

最后， 该 线虫 利用 从 摄入的 dsRNA 中获得的 序列 信息， 来 下调 具有 互补 序列的 内源性 mRNA 的表达。 在本实验中， 我们 将 制备 含有 转 基因 大肠杆菌 的 RNAi E. coli 平板， C. elegans 通过摄食这些平板进行实验。

- 对于 的 RNA干扰 培养皿, 加载 6厘米 培养皿 与 NGM 琼脂 含有 IPTG 和 羧苄青霉素 让 它们 干燥 用于 24 到 48 小时 在 室 温度 在 的 暗处 然后， 转移 他们 到 4 度 摄氏度 用于 上 到 14 天。

接下来， 划线接种 选择性 培养皿 含有 羧苄青霉素 和 四环素 与 RNAi 细菌 克隆 与 L4440 质粒 携带 的 lin-53 基因 使用 a 三相 划线接种 模式 和 是 确定 到 板 一个 空 载体 对照 然后， 生长 的 平板 过夜 在 37 度 摄氏度

的 下一步 天， 挑选 在 最少 三 单个 菌落 和 接种 每个 的 他们 进入 a 分离 培养 管 与 2 毫升 的 LB 补充 与 羧苄青霉素 但 不 四环素 方案 到 有 三 健康 培养物 每 条件

接下来， 培养 的 培养物 过夜 在 37 度 摄氏度 直到 他们 达到 一个 光学 密度 在 600 纳米 的 0.6 到 0.8. 然后， 添加 500 微升 的 每个 细菌 培养 到 a 6厘米 NGM 琼脂 RNAi 平板 孵育 的 培养皿 过夜 在 房间 温度 在 的 暗