活体显微注射 果蝇 胚胎：向发育中胚胎早期递送试剂

- 收集 活体 果蝇 胚胎 和 移除 他们的 不透明 绒毛膜 然后， 到……上 a 玻璃 盖玻片, 应用 a 线 的 庚烷 胶水， 哪个 是 胶带 粘合剂 溶解 在 液体 庚烷 为了 是 能够 到 手柄 的 现在 去卵膜的 胚胎， 仔细地 对齐 的 样本 在 a 行 到……上 的 粘合剂。

转移 的 盖玻片 进入 a 脱水 腔室 到 部分地 干燥 的 胚胎 这 将 防止 细胞质的 泄漏 在……期间 或 之后 注射 接下来， 移除 的 盖玻片 和 盖子 的 胚胎 与 卤代烃 油 到 防止 进一步 脱水 而 仍然 允许 氧气 至 弥散 进入 的 胚胎

至 执行 的 显微注射 使用 a 显微注射 系统 开启 a 兼容的 显微镜 由 观察 通过 的 眼睛 片段， 识别 两者 的 胚胎 和 的 针 预载 与 注射 溶液 断裂 开放 的 针 和 确保 那 它 产生 一致的 和 大小合适的 液体 滴 然后， 带来 的 针 内部 的 胚胎 和 注射 的 适当的 体积 带来 出 的 针， 和 继续 到 的 下一步 一， 重复 的 注射 用于 的 剩余 胚胎

在 本 示例 方案中，我们将看到一Drosophila胚胎微注射技术的演示，用于细胞分裂的活体成像研究。

- 之前 设置 向上 的 盖玻片, 制作 庚烷 胶水 由 展开 双面粘性 胶带， 和 放置 它 在 a 100 毫升 瓶 添加 关于 50 毫升 的 庚烷， 密封 的 瓶 和 摇动它 用于 多个 天。

之前 准备 的 胚胎， 制作 a 脱水 腔室 那个 的 胚胎 将 是 放置 在 之前 到 注射 为了 做 此， 放置 一 部分 的 a 35 毫米 培养皿 内部 的 a 100 毫米 佩特里 培养皿 到 制作 a 表格 添加 干燥剂， 哪个 是 无水的 钙 硫酸盐， 大约 它 因此 那 的 高度 的 的 Drierite 是 无 较高 比 的 表格 和 盖子

至 开始 准备 的 胚胎， 首先 收集 它们 从 的 放置 笼 由 改变 的 葡萄 果汁 培养皿 与 酵母 每个 小时 该 胚胎 应该 是 成像 关于 二 小时 之后 的 开始 的 的 收集 至 准备 的 盖玻片 位置 它 在 一 侧面 的 a 显微镜 载玻片 和 胶带 的 四 角落 下调 因此 它 不 移动。

使用 a 棉签式 施用器， 放置 一 层 的 庚烷 胶水 在 a 线 在 的 盖玻片 的 胶水 应该 不 是 黏性 和 应该 干燥 在 a 少数 秒 如果 它 是 也 厚的 添加 更多 庚烷

最后， 放置 a 块 的 双面粘性 胶带 在 的 载玻片 下一步 到 的 盖玻片 随着 a 湿润的 刷子, 仔细地 挑选 向上 这 胚胎 从 的 葡萄 果汁 培养皿 和 位置 它们 开启 的 双面粘性 胶带 开启 的 载玻片

接下来， 使用 一 一半 的 a 镊子 到 滚动 的 胚胎 结束 的 双面粘性 胶带 直到 的 绒毛膜 断裂 打开 挑选 向上 的 胚胎 由 轻柔地 滚动 它 结束 的 绒毛膜， 因此 它 棒状物 到 的 镊子， 和 位置 它 开启 的 庚烷 胶水 在 的 盖玻片 与 的 长 侧面 的 的 胚胎 平行 到 的 长 侧面 的 的 盖玻片

放置 10 至 20 胚胎 在 一 行 移除 的 盖玻片 和 位置 它 在 的 脱水 腔室 用于 三 到 八 分钟 的 时间 取决于 开启 的 局部 湿度 和 的 量 到 是 注射。 接下来， 位置 的 盖玻片 在 a 金属 腔室 与 真空 润滑脂 最后， 盖子 的 胚胎 与 卤代烃 油 到 避免 进一步 脱水 这 胚胎 是 现在 准备就绪 用于 注射

首先， 找到 的 胚胎 在……下方 a 16X 目的。 移动 的 胚胎 远离 和 查找 的 针 无 移动 的 焦点 平面。 中心 的 针 和 移动 它 向上 无 移动 它 在 的 X 或 Y 方向。

为了 开放 的 针， 放置 的 边缘 的 的 盖玻片 进入 的 领域 的 查看， 但 不 其中 a 针 将 是， 和 较低 的 针 到 的 相同 焦点 平面。 非常 小心地， 移动 的 盖玻片 直到 它 命中数 的 针 和 轻柔地 断裂 它 开放 移动 的 针 向上

现在 带来 的 胚胎 进入 视图 下部 的 针 进入 的 油， 和 制作 当然 到 获得 很好 液体 滴 从 的 针 稳定地 移动 的 胚胎 进入 的 针， 注射 a 滴 进入 这 胚胎， 和 然后 移动 的 胚胎 远离。 之后 全部 的 胚胎 有 已经 注射 他们 是 准备就绪 用于 观察 开启 a 共聚焦 显微镜 与 a 60 或 a 100X 目的