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- 要解剖环形腺体,您需要一台解剖显微镜、两把镊子、一根用作解剖刀的细针和缓冲溶液。通过识别幼虫的头部来找到环腺,其中包含口钩。沿着幼虫的长度旅行,找到大脑,它位于胸部和腹部之间。环形腺比大脑小,位于顶部。
幼虫环腺是一个复杂的内分泌结构,包含三个不同的内分泌器官。大体位于环腺的中心,产生保幼激素,调节发育和衰老。前胸腺围绕着大体,构成了结构的大部分。蜕皮激素是一种参与昆虫麦芽的激素,由这个腺体产生。前胸腺下方是贲门体,它产生脂肪动力学激素,一种营养调节剂。
在这个例子中,我们将解剖幼虫大脑和环腺进行免疫组织化学。
- 准备好幼虫后,在解剖显微镜下,在装满 PBS 的 3 厘米培养皿中开始解剖。首先,用镊子抓住口钩。然后,使用微型剪刀,从前尖端大约三分之一的长度处切断身体。接下来,用一对镊子握住前部长度,并使用第二对镊子轻轻地将头尖推入体内,最终将幼虫身体翻过来。
在 10 分钟内以这种方式制备多达 20 只幼虫,然后将它们转移到固定液中。30 分钟后,清洗制剂并继续进行免疫染色。对幼虫进行免疫染色后,使用一次性移液器将样品转移到装有 0.3% PBT 的培养皿中。
在解剖显微镜下,用一对镊子抓住角质层或口钩。然后,使用像刀一样连接到 1 毫升注射器的 27 号针头,通过切掉食道和眼盘的前尖端,从身体角质层中取出脑环腺眼盘复合体。
接下来,使用镊子小心地将食道和肠道与脑环腺眼盘复合体分开。将肠道拉出到后侧,因为食管穿过腹侧神经索上方的大脑。最后,为了隔离脑环腺复合体,用针刀小心地切断脑盘、眼盘和腿盘之间的连接。
- 解剖过程中使用带有锋利边缘的细镊子非常重要。我还强烈建议您用阿肯色州的磨石磨镊子,使它们的边缘合拢,没有任何间隙。
- 要转移样品,请使用带有宽口径尖端的微量移液器。将样品沉积在载玻片的中心。然后,使用镊子将样本定位到其腹侧,以便对位于大脑背侧的环形腺进行成像。接下来,倾斜载玻片并尽可能多地擦去多余的 PBT。然后,在样品附近滴一滴封固剂,用镊子慢慢将盖玻片放到试剂上,然后放到样品上。