温度梯度测定：在 德罗索菲拉拉 瓦测试温度偏好的方法

- 为了测试果蝇幼虫的温度偏好，通过加热铝检测板的一侧并冷却另一侧来产生温度梯度。铝具有高导热性，这意味着热量可以有效地传递，从而产生稳定的线性温度梯度。系统平衡后，在相同大小的温度区记录整个板的温度，然后用干净的幼虫加载板的中心。

覆盖整个系统以消除强光干扰并开始试用。幼虫通过梯度分布，避开太热或太冷的厌恶区，并在有利的温度区定居。这种行为称为趋热性。为了评估幼虫的温度偏好，请记录每个温度区的动物数量。

在示例方案中，我们将了解如何在 18 到 28 摄氏度之间设置单向温度梯度，以及在测定过程中如何处理幼虫。

- 要制备单向梯度，首先，为检测创造一个潮湿的环境。将两个连接到单独水浴的铝块放在相距 10 厘米的湿纸巾上。水浴需要提前加热。接下来，制备 100 毫升 1% 琼脂糖，并在水平表面上向每个测定板中加入 25 毫升。琼脂糖凝固后，用三聚氰胺海绵轻轻擦拭表面，使表面略微粗糙。

然后，为了促进有效的温度传递，用喷雾瓶输送的水填充检测板中铝块之间的任何间隙。现在，将检测板放在铝块上，并确保分界线距任一边缘 2 厘米，以与铝块的边缘完全匹配。

接下来，在板表面喷洒一层水膜，使凝胶不会变干。接下来，用纸板箱覆盖系统以减少蒸发并帮助稳定凝胶表面的温度。等待 5 到 10 分钟，让温度达到平衡。然后，检查板上至少 12 个位置的表面温度，以确保整个温度均匀，或多或 2 摄氏度。然后，更换盒盖，直到进行检测。

首先，取下凝胶上的纸板箱，快速检查凝胶表面温度。如果表面干燥，请在表面喷洒少量水。如果凝胶很好，则使用小画笔在每个板的中心加载 100 到 200 只幼虫。然后，在每个分析板上盖上盖子以捕获幼虫，并用纸板箱盖住设置以防止光照。该检测目前正在进行中。

10 到 30 分钟后，取下纸板箱和微孔板盖。然后，从上方拍摄板以记录幼虫的位置。将盒子放在相机上方，以避免反射到凝胶表面。要清理板，请将所有幼虫吸出它们可能散落的地方。

现在，使用图像分析软件计算每个区域中幼虫的百分比分布。根据测定板上的分界线每 2 厘米画线，并计算每个区域中的幼虫数量。

- 计数时，忽略分布在距每个边缘 0.5 厘米的区域的幼虫。凝胶厚度和温度条件在边缘附近不均匀。