C. 埃莱甘斯 爆破切除：去除蛋壳和分离胚胎细胞的方法

- 对于这种解剖，使用两个微量移液器:一个的开口宽度与鸡蛋大致相同，另一个的开口是鸡蛋的两倍，并且将一系列溶液组织在孔中，以促进它们之间的快速转移。

首先，将成年雌雄同体放入蛋盐溶液中，该溶液是渗透平衡的，以防止胚胎破裂。将蠕虫切成两半以释放发育中的胚胎。

然后，识别双细胞期胚胎。这些细胞是由受精卵分裂形成的卵裂球。使用开口较大的微量移液器将胚胎转移到次氯酸盐溶液、漂白剂中，这将开始分解保护性蛋壳。

仅 40 到 55 秒后，将胚胎转移到 Shelton 生长培养基或 SGM 中。在 SGM 的两个孔中短暂洗涤每个胚胎，以去除所有漂白剂痕迹，然后将它们放入第三个孔中。

现在，使用较小的微量移液器反复移液胚胎，提供机械力以去除蛋壳并暴露卵裂球。轻轻地继续移液胚胎以分离单个卵裂球细胞。在下面的协议中，我们将看到这种技术的实际应用。

- 用右手和左手握住容量为 10 μL 的微毛细管的每一端。将微毛细管拉向两端以施加张力，并将毛细管的中心放在燃烧器上，形成两个手拉的毛细管。

在解剖显微镜下，用镊子修剪手拉毛细血管的尖端。使两个尖端开口尺寸大约是秀丽隐杆线虫胚胎短轴长度的两倍和一倍，分别用于胚胎移植和蛋壳去除。

将拉出的毛细管连接到口中移液装置中。将 45 微升蛋盐溶液移液到多孔载玻片的孔上。

将 5 到 10 个成年秀丽隐杆线虫放在井上。为了获得早期秀丽隐杆线虫胚胎，通过将两根针放在秀丽隐杆线虫身体的右侧和左侧并将针头相互滑过，将成虫切成块。

45 微升次氯酸盐溶液移液到含有蛋盐溶液的孔旁边的孔上，然后将 45 微升 Shelton 生长培养基移液到随后的三个孔中。用开口较大的口腔移液管将单细胞期和早期双细胞期胚胎转移到 hypochorite 溶液中，等待 40 至 55 秒。

用 Shelton 生长培养基将胚胎转移到接下来的三个孔中，在前两个孔中分别放置 1 到 2 秒，以洗涤胚胎。使用具有较小尺寸开口的手绘毛细管，小心地重复移液胚胎以去除蛋壳。

之后，用手拉毛细管连续移液以分离双细胞期胚胎卵裂球。

- 去除蛋壳后，尽量减少上下移液胚胎的力，以防止爆裂。