酶解与手动解离：一种制备秀丽隐杆线虫（C. elegans）胚胎用于细胞培养的方法

- 开始 与 沉淀的 卵 那 是 分离的 由 漂白 妊娠的 成年 蠕虫。 确保 每个 步骤 的 这 实验步骤 是 进行 无菌地 到 避免 污染 的 的 培养的 细胞 悬浮 的 沉淀物 在 a 溶液 的 几丁质酶, 一个 酶 那 断裂 向下 几丁质-- a 大 多糖 那 是 a 结构的 组分 的 的 卵 壳

之后 一个 适当的 消化 周期， 轻柔地 离心机 的 卵 和 替换 的 上清液 与 细胞 培养 培养基 到 停止 的 消化 然后， 通过 的 胚胎 通过 一个 18号针头 针 到 机械地 分离 个体 细胞 接下来， 过滤器 的 溶液 到 移除 碎片 从 的 卵 壳 或 未分离的 细胞 团块。 培养皿 的 细胞 在 a 培养 培养皿 在 a 玻璃 覆盖 滑动 包被 与 花生 凝集素-- a 凝集素 那 有助于 的 细胞 连接 到 的 盖子 滑动 由 结合 细胞 表面 碳水化合物

在 本 示例 方案中，我们 将 制备 胚胎 细胞 以 体外 培养 形态学 分化 并 进行分析。

- 尽管 工作 下 a 层流 流 通风橱 到 避免 介绍 细菌 污染， 重悬 的 沉淀的 卵 在 一 毫升 的 二 毫克 每 毫升 几丁质酶 和 转移 它们 到 a 新鲜 15 毫升 圆锥形的 管 岩石 的 管 用于 10 到 30 分钟 在 房间 温度 取决于 在 的 新鲜度 的 的 酶 当 大约 80% 的 的 卵 壳 是 消化， 离心机 的 卵 在 900 g 用于 三 分钟

之后 仔细地 去除 的 上清液， 添加 三 毫升 的 L15 培养基 转移 的 卵 进入 a 六- 厘米 直径 培养皿 和 开始 手动 解离 使用 a 10毫升 无菌的 注射器 与 一个 18号针头 针 为了 监测 的 度 的 解离 位置 a 滴 的 悬浮液 进入 a 新鲜 培养皿 培养皿 和 查看 下 a 显微镜 继续 直到 大约 80% 的 的 细胞 是 解离。

为了 移除 细胞 团块， 未消化的 卵子， 和 孵化 幼虫， 轻柔地 过滤器 的 悬浮液 通过 a 五- 微米 过滤器 和 运行 一个 额外的 四 到 五 毫升 的 L15 培养基 通过 的 过滤器 到 回收 的 细胞 至 培养 的 细胞 之后 离心 的 滤液 在 900 g 用于 三 分钟 重悬 的 细胞 完全培养基 L15 培养基 培养皿 一 毫升 每 嗯， 和 储存 平板 在 a 湿润 密封的 腔室 在 20 度 摄氏度 在 环境的 空气