C. 埃莱甘斯 化疗分析:在蠕虫中测试化学感官的方法

0 次观看4:43 分钟 • April 30th, 2023

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- 为了理解遇到的条件并做出相应的反应,线虫 C. elegans 具有高度发达的化学感应系统,能够检测各种不同的化学物质。

头部的感觉神经元,两足神经元和内唇神经元,以及尾部的神经元,足粒神经元,直接或间接地通过角质层暴露在外部条件下。这些化学感应神经元编码蠕虫使用的相关信息,以产生适当的行为反应:这种行为称为趋化性。

为了测试对挥发性气味或味觉水溶性线索的趋化反应,分离所需发育阶段的蠕虫,并将它们暴露在先前准备好的实验舞台上的测试化学品中。当暴露于有益的化学物质(如细菌食物来源产生的化学物质)时,秀丽隐杆线虫对源表现出积极的趋化性。

相反,当暴露于不太有利或毒性较低的化学物质(如重金属)时,蠕虫会表现出负趋化性,从而避开这种化学物质。因此,与避免厌恶条件的野生动物相比,嗅觉或味觉突变体无法避免厌恶化学物质并保持在不利条件下。

在示例方案中,我们将看到趋化性测定的演示,测试蠕虫对铜的厌恶。

- 孵育过夜后,从培养箱中取出板,以板的标记底面为指导,在琼脂边缘吸取 100 微升新鲜制备的 0.5 摩尔硫酸铜溶液,以形成外部铜屏障。移液 25 微升硫酸铜溶液以形成中线屏障。

确保铜二硫酸盐溶液不接触细菌斑块,并让铜溶液干燥到板上。用实验室组织转移后,每五分钟检查一次干燥度,方法是在板边缘附近轻轻擦拭溶液以辨别。

在测定之前,立即将实验生物体转移到无菌琼脂平板上,让线虫自由移动一分钟以去除多余的细菌。

接下来,将 1 毫升 M9 移液到与 24 小时前转移的年轻人一起的板上,以便将蠕虫洗入微量离心管中。将线虫以 3,000 倍 g 离心 1 分钟。

蠕虫应在试管底部形成颗粒。吸出 M9 溶液而不破坏蠕虫颗粒。向蠕虫颗粒中加入 1 毫升 M9 溶液。倒置试管,将蠕虫与溶液混合。

如果过量的细菌最初随蠕虫一起转移,请重复总共五次。最后一次洗涤后,吸出上清液直至 100 μL M9 溶液,残留蠕虫沉淀。洗涤步骤完成后,立即从溶液中转移蠕虫。

试管底部吸取 20 微升蠕虫颗粒到检测板的无菌半部分。确保将 10 条蠕虫转移到检测板中,并且不存在污染食物。不应将细菌转移到铜质食物赛跑盘上。

在一分钟内用实验室组织从线虫中去除多余的 M9 溶液。确保 M9 溶液不与铜二硫酸盐溶液接触,并且蠕虫和琼脂表面保持完整。丢弃与实验室组织一起意外去除的蠕虫。

一旦去除 M9 溶液并且所有蠕虫都开始非液体运动模式,当它们停止抽打时,启动检测秒表。如果不小心包含额外的蠕虫,请用卤代烃油采摘将其去除,以确保没有细菌添加到板中。

每 30 分钟检查一次检测板。对于带有细菌斑块的检测板,如果生物体在 4 小时内到达食物斑块,则对生物体进行正评分。对于阴性对照板,如果生物体已越过屏障,则对它们进行正评分。

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最后更新:1 八月 2026