C. elegans 运动追踪：一种评估线虫运动能力的方法

- 为了 评估 运动 在 C. 秀丽隐杆线虫, 使用 a 相机 到 记录 的 蠕虫 运动 开启 一个 琼脂 平板， 确保 即使 照明 的 的 培养皿 在……期间 的 记录 至 限制 的 线虫的 运动 左右 的 平板， 使用 铜 环 铜 是 厌恶的 到 C. 秀丽隐杆线虫, 因此 线虫 是 圈禁 在……之内 的 环状结构。

放置 若干 铜 环 到……上 一 培养皿 到 同时 追踪 线虫 在 每个 环 这 允许 的 评估 的 对照 和 实验的 动物 到 是 执行 在……下方 相同的 条件， 减少 天 至 天 变异性 和 允许 用于 侧面 由 侧面 比较 记录 的 蠕虫 运动 结束 设置 时间 间隔， 和 使用 计算机 软件 至 分析 特征 的 的 运动的 行为 如此 作为 的 速度 的 运动 和 距离 移动的距离。

在 的 示例 方案 我们 将 见 a 演示 的 a 运动 追踪 检测 测试 的 效应 的 酒精 在 的 蠕虫的 运动 速度

- 至 开始， 取 二 分钟 或 较少 到 转移 10 线虫 从 每个 实验的 组 到 的 中心 的 a 铜 环 在 一个 驯化 平板 这 是 a 培养皿 与 无 乙醇 避免 转移 食物 与 的 线虫 作为 它 将 减少 他们的 运动 此外 避免 有害的 的 琼脂 表面 因为 的 线虫 将 洞穴 记录 的 时间 的 加载中 到……上 的 平板， 和 是 当然 到 交错排列 的 转移 的 线虫 到 每个 培养皿 由 结束 二 分钟， 因此 每个 培养皿 可以 是 拍摄 单独地 在 的 适当的 时间 间隔。

让 每个 驯化 平板 孵育 在 室 温度 用于 30 分钟 然后， 转移 的 线虫 到 的 检测 平板， 随后 的 顺序 使用 到 位置 的 线虫 在 的 驯化 平板 使用 a 薄边 扁平化 蠕虫 挑选 无 细菌， 收集 的 线虫 开启 顶部 的 的 扁平化 挑选 使用 a 舀取 运动 然后， 密封 的 培养皿 与 实验室 薄膜 到 最小化 损失 的 乙醇 到 汽化

- 的 速度 在 哪个 的 动物 是 转移 在 这 步骤 是 非常 重要， 因为 的 转移 动物 将 是 暴露 到 乙醇 更长。 所以 它 是 a 良好 想法 至 旋转 哪个 菌株 是 放置 开启 的 平板 首先 跨越 实验的 重复组

- A 显微镜 与 高 分辨率 视频 相机 是 必需的 至 薄膜 的 线虫 现在。 即使 照明， 如此 作为 从 a 三英寸 方形 背光 是 重要的 用于 的 分析。 然后， 至 维持 对比， 图像 的 培养皿 培养基 侧面 上

准备 的 图像 分析 软件 到 捕获 120 帧， 12位， 灰度 延时 视频 在 一 帧 每 第二。 为了 减少 的 大小 的 的 输出 文件 而 仍然 保留 充足 图像 分辨率 使用 a 二乘二 分箱 模式。

现在 记录 两分钟 视频 从 每个 平板， 10 分钟 之后 的 最后 线虫 是 放置 在 那 平板 然后 制备 a 第二 两分钟 记录， 30 分钟 之后 线虫 是 放置 开启 的 板 对于 这 示范 Image-Pro 加 软件 是 使用， 作为 a 宽视野 品种 的 其他 软件 能 是 改编的 到 的 技术 分析 的 视频 作为 两分钟 片段

首先 应用 a 过滤器 到 的 图像 那 压平 的 背景 和 增强 的 对比 的 的 蠕虫 物体。 下 的 菜单， 选择 过程, 然后 过滤器， 然后 增强， 和 然后 压平。 设置 的 参数 用于 a 暗 背景 和 a 20 像素 特征 宽度

现在， 分别对每个环内的动物 的 运动行为进行分析 ， 在 每 个 环 上 单独设置 一个 与 铜环 重叠的 圆形 感兴趣区域 。通过 “测量”子菜单中的 “ 追踪对象 ”命令来识别并追踪线虫。 识别 并 追踪 每条 线虫 ， 使用 “ 追踪对象 ” 命令 ， 该命令位于 “测量”子菜单下。

在 的 追踪 数据 表格 窗口， 使用 的 追踪 选项 按钮 到 允许 特异的 轨迹 到 是 排除 和 到 限制 任何 实验的 伪影。 下方 的 自动 追踪 标签, 设置 的 追踪 参数 到 a 速度 限制 的 400 微米 每 帧 设置 的 加速度 限制 到 自动的

设置 的 最低限度 总计 追踪 长度 到 400 微米， 和 设置 的 主要的 运动 类型 到 混乱的。 然后 在……下方 的 追踪 参数， 设置 的 物体 到 允许 部分 轨迹 到 有 a 最低 长度 的 21 帧 和 到 有 a 追踪 投射 深度 的 一 框架。

现在， 到 启动 的 追踪 过程， 首先 点击 的 查找 所有分类 自动地 功能 按钮。 这 带来 向上 的 计数/尺寸 选项 对话 盒子 和 的 追踪 对话 盒子 选择 的 手动 选项 用于 的 强度 范围 选择 在 的 计数/尺寸 对话 盒子 这 提供 一个 重要 阈值 步骤。 然后 调整 的 强度 阈值 滑块 至 创建 一个 包容的 范围 那个 亮点 暗 物体。 A 良好 开始 点 开启 的 规模 是 之间 0 到 1,500.

现在 应用 a 大小 过滤器 到 排除 物体 那 是 较大 或 较小 比一个 单个 蠕虫 开始 到 的 测量 菜单， 和 然后 选择 测量 sub 菜单 这 打开 的 计数/尺寸 选项 对话 盒子 在那里， 设置 的 面积 范围 到 28,000 到 120,000 方形 微米 且 设置 的 周长 范围 到 600 至 2,500 微米 制作 调整 到 这些 参数 当 使用 线虫 的 异常 大小

现在， 完整 的 追踪 过程 由 点击 继续 在 的 追踪 对话 盒子 双倍 检查 那 的 输出 轨迹 与 的 视频 影像资料。 制作 确定 每个 蠕虫 是 代表 除非 那里 是 a 清除 原因 到 过滤器 它。 然后， 手动地 删除 轨迹 产生 由 非线虫 物体。

接下来， 通过计算每帧或每秒之间线虫移动距离的平均值， 来 计算 每条 线虫的 运动速度， 并 为 每个 群体中 的 轨迹 创建 平均 速度。 将 该最终平均值视为一次实验统计分析中的一个 样本 数据点。 将 该 最终 平均值 作为 实验 统计 分析 的一个 样本 点 来 考虑。 将 该 最终 平均值 视为 实验 统计 分析 的 一个 样本点。