钙成像:一种在活C.电子人中可视化神经活动的方法

0 次观看2:23 分钟 • April 30th, 2023

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- 将一条表达 GCaMP(一种钙传感蛋白)的转基因蠕虫与蠕虫的细菌食物一起放入成像室中。然后用盖子和实验室胶片密封培养皿以防止蒸发。在配备宽视场落射荧光的复合显微镜下观察它。记录蠕虫的延时图像以跟踪其行为并使用成像软件捕获荧光。

转基因蠕虫在驱动特定神经元中 GCaMP 表达的启动子控制下表达 GCaMP 传感器蛋白。当该神经元被激活时,它会触发动作电位,使质膜去极化。去极化后,电压门控钙通道在质膜中打开。这会导致钙离子流入细胞,从而导致神经元兴奋。

兴奋神经元中的 GCaMP 结合钙离子。这导致当蠕虫用低强度荧光激发光成像时,GCaMP 会发出荧光。在示例方案中,我们将使用钙成像来可视化琼脂糖微室中转基因秀丽隐杆线虫中的 AVA 中间神经元活性。

- 钙成像在配备宽视场落射荧光的复合显微镜上进行。为了限制曝光,请使用晶体管-晶体管逻辑信号,该信号触发 LED 以照亮样品,同时相机会录制一帧。

运行 24 小时的连拍影片,每 15 到 30 分钟对每个蠕虫进行一次成像。首先,用 DIC 记录 20 秒,然后用 GFP 荧光记录 20 秒,最后,获得用于对照表达水平的 mKate2 信号图像。

对于视觉数据检查,使用假彩色图来增强荧光强度微小变化的可见性。最后,使用标准程序进行钙数据分析。

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最后更新:1 八月 2026