钙成像：一种在活体 C. elegans 中可视化神经活动的方法

- 放置 一 转基因的 蠕虫 表达 GCaMP-- a 钙 传感 蛋白-- 在 一个 成像 腔室 沿 与 细菌 食物 用于 的 蠕虫 然后 密封 的 培养皿 与 的 盖子 和 实验室 薄膜 到 防止 蒸发 查看 它 在……下方 a 化合物 显微镜 配备 用于 宽视野 领域 落射荧光 记录 时间 失误 图像 的 的 线虫 到 追踪 它们的 行为 和 捕获 荧光 使用 成像 软件

转基因 蠕虫 表达 a GCaMP 传感器 蛋白 在……下方 的 对照 的 a 启动子 那 驱动 GCaMP 表达 在 a 特异的 神经元 当 那 神经元 是 活化的， 它 火灾 一个 动作 电位 哪个 去极化 的 血浆 膜 在……之后 去极化， 电压门控 钙 通道 开放 在 的 血浆 膜 这 导致 一个 流入 的 钙 离子 进入 的 细胞 导致 在 神经元的 激发

GCaMP 在 的 兴奋的 神经元 结合 的 钙 离子 此 导致 GCaMP 到 荧光 当 的 线虫 是 成像 与 a 低 强度 荧光 激发 光 在 的 示例 方案 我们 将 使用 钙 成像 到 可视化 AVA 中间神经元 活性 在 转基因的 C. elegans 在 琼脂糖 微室

- 钙成像 在 一台 配备 宽场 落射 荧光 功能 的 复合 显微镜 上 进行 。为 限制 光照 暴露 ， 使用 一个 晶体管-晶体管 逻辑 信号 来 触发 LED ， 在 相机 采集 一帧 图像 的 同时 对 样品 进行 照明 。

运行 a 爆发 视频 用于 24 小时 那 图像 每个 蠕虫 每个 15 到 30 分钟 首先， 记录 20 秒 与 弥散性血管内凝血 然后 20 秒 与 GFP 荧光 和 最后， 一个 图像 的 的 mKate2 信号 用于 对照 表达 水平

对于 视觉 数据 检查 使用 a 错误 颜色 地图 到 增强 的 可见度 的 小 变化 在 荧光 强度 最后， 执行 钙 数据 分析 使用 标准 步骤。