表皮激光损伤：在 C. elegans 中诱导局部损伤以研究修复过程

- 为了 开始， 转移 年轻 成年 线虫 到……上 a 新鲜 琼脂糖 垫 在 a 载玻片 然后 添加 a 少数 滴 的 12 毫摩尔（mM） 左旋咪唑 溶液 至 麻痹 的 线虫 封面 的 线虫 与 a 盖玻片 和 等待 用于 a 少数 分钟 放置 的 载玻片 下 a 旋转 圆盘 共聚焦 显微镜 和 焦点 开启 的 侧向 最外层 表面 的 的 蠕虫

成年 蠕虫 的 表皮 是 一 层 薄 而 单 层 的 结构，由 多 核 合 胞 体 经 细胞 融合 事件 形成。表皮 的 顶端 表面 分泌 一层 柔韧 的 胶原 性 角质层，而 基底 表面 则 覆盖 一层 称为 基底 膜 的 薄 层 细胞外基质。

接下来， 伤口 的 顶端的 表面 的 的 表皮 与 a 激光 细胞质 从 的 受损 细胞 可能 泄漏 出 出现 作为 a 气泡 在 的 伤口 位点。

激光 辐照 有 一个 优势 结束 其他 技术, 如此 作为 针 损伤， 作为 它 导致 局部的 破坏 的 的 角质层 和 表皮的 细胞 无 损伤性 内部 组织。 在 的 示例 方案 我们 将 见 的 过程 的 激光 损伤 在 C. elegans

- 为 精确 损伤 线虫 ， 本 方案 采用 一 台 飞秒 激光器 ， 该 激光器 连接 于 转盘 共 焦 显微镜 。使用 飞秒 激光器 进行 线 扫描 或 点 扫描 ， 例如 双光子显微镜中的激光器，同样可行。

- 开始 由 收集 10 年轻 成虫 开启 一个 琼脂 垫板 麻痹 他们 在 a 二 微升 滴 的 12 毫摩尔 左旋咪唑 溶液 然后 覆盖 它们 与 a 盖子 滑动 和 等待 a 少数 分钟 而 他们 麻痹

- 动物必须完全麻痹。 12 毫摩尔 的 左旋咪唑 不会影响伤口反应。 然而， 也可使用其他固定方法。 . 12 millimolar levamisole will not affect the wound response. However, other methods of immobilization can also be used.

- 确保 那 的 飞秒 激光 功率 是 设置 至 140 毫瓦， 作为 测量 之前 的 目标， 和 的 激光 重复 速率 是 在 80 兆赫 现在， 定位 的 线虫 下 a 旋转 圆盘 共聚焦 显微镜 使用 a 100x 目的 与 a 高 数值的 孔径 焦点 在 的 侧向 前部 或 后侧 合胞的 表皮 的 的 目标 蠕虫

聚焦 在 的 顶端的 表面 的 的 表皮的 细胞 发光 的 激光 用于 到 二 200 毫秒 脉冲 分离的 由 20 毫秒 这 应该 是 充足 至 伤口 的 表皮 等待 a 时刻 和 观察 的 局部 破坏 的 细胞质， 哪个 将 出现 作为 冒泡。 如果 a 荧光的 标记物 是 存在 局部的 漂白 能 是 观察到。