FITC-德克斯特兰喂养:量化C.elegans肠道渗透性的方法

0 次观看2:56 分钟 • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- 丽隐杆线虫被用作肠道病原体感染的实验模型,这些病原体在一定程度上是通过破坏肠道屏障,增加其通透性而引起的疾病。为了量化暴露于目标细菌或化合物后的屏障完整性,通过从板中清洗蠕虫来收集蠕虫。

接下来,将这些蠕虫放在琼脂平板上,上面有标记的食物,该食物由热灭活的大杆菌与 FITC-葡聚糖(一种带有荧光标签的高分子量多糖)混合而成。

让蠕虫吃掉标记的细菌。那些肠道屏障完整的蠕虫会迅速清除食物,而在肠道渗透性更强的蠕虫中,荧光标记物会渗透到器官腔之外。

将蠕虫转移到甲醛溶液中以固定动物。1 到 2 分钟后,用封固剂更换甲醛。

最后,通过荧光显微镜对蠕虫进行成像。请注意,丽隐杆线虫肠道颗粒是自发荧光的,因此会有背景信号。但总体而言,更多的肠道荧光表明更高的通透性。

在示例方案中,我们将测定用生物分子 DIM 处理对感染致病性铜绿假单胞菌的蠕虫肠道通透性的影响。

- 将 2 毫升热灭活的大肠杆菌与 4 毫克 FITC-葡聚糖混合,制备补充 FITC-葡聚糖的板。将 100 微升混合物添加到 20 个新鲜 NGM 琼脂板中,并在干净的实验室工作台上让板干燥一小时。处理 48 小时后,用 S 缓冲液清洗蠕虫。将它们转移到补充 FITC-葡聚糖的板和不含 FITC-葡聚糖的 NGM 板中,并将板孵育过夜。

第二天,用 S 缓冲液洗涤蠕虫,让它们在新鲜的 NGM 琼脂平板中爬行 1 小时。向黑色 96 孔平底板的每个孔中加入 50 微升 4% 甲醛,并将大约 50 个蠕虫转移到每个孔中。1 至 2 分钟后,去除所有甲醛,并向每个孔中加入 100 微升封固剂。

- 甲醛是一种有毒化学物质,应小心处理。

12:15

C. 线虫小肠作为细胞间腔形态发生和体内极化膜生物单细胞水平的模型: 抗体染色、rna 干扰功能分析和成像标记

相关视频

0 观看次数

08:04

人肠道 Organoids 上皮屏障通透性的实时测量

相关视频

0 观看次数

10:22

肠上皮细胞通透性的体外体内测定方法

相关视频

0 观看次数

09:44

在啮齿类动物的肠动力及胃肠壁的炎症分析功能评价一个标准化的模式肠道操作

相关视频

0 观看次数

02:45

细菌暴露后秀 丽隐杆 线虫肠道通透性的评估

相关视频

0 观看次数

06:04

体外肠囊评估黏膜通透性在胃肠道疾病模型

相关视频

0 观看次数

08:58

分析营养补充剂的有益作用于肠上皮屏障功能在实验性结肠炎

相关视频

0 观看次数

07:23

测定细菌和化学物质对开牛结不二病的肠道渗透性的影响

相关视频

0 观看次数

07:32

基于内显微镜的方法,用于评估肠道渗透性和上皮细胞脱落性能

相关视频

0 观看次数

09:24

使用标准化肠道循环模型对小鼠肠道渗透性和中性粒细胞转导的功能评估

相关视频

0 观看次数

最后更新:1 八月 2026