紫外线照射：一种整合游离型基因阵列的方法

- 创建 染色体外的 DNA 阵列 由 显微注射-- 的 最简单的 方法 到 生成 转基因的 蠕虫 菌株-- 结果 在 遗传学 元素 那 是 不 稳定地 透射 在……期间 细胞 分裂 且， 因此， 展示 可变的 遗传 速率 和 表达 水平 的 目标 的 整合 的 阵列 进入 a 染色体 是 到 减轻 这个 遗传学 不稳定性 和 变异性

为了 执行 因此， 开始 与 一个 年龄同步的 种群 的 L4 转基因的 线虫， 哪个 携带 一个 染色体外 阵列 此前 引入 由 显微注射 和 允许 它们 到 培养 进入 妊娠的 成虫 转移 这些 成虫 到 新 平板 和 允许 它们 到 放置 卵 直到 那里 是 在 最少 30 卵 在 每个 平板 移除 的 成虫 和 允许 的 卵 到 培养 上 直到 他们 达到 的 L4 阶段 然后， 辐照 的 线虫 与 紫外 光 这 导致 随机 双链 断裂 在 的 基因组的 DNA 其中 的 线虫 DNA 修复 机械装置 可能 任意地 整合 的 阵列

之后 一个 过夜 恢复 周期， 计数 数量 的 存活 线虫 A 小 百分比 的 死亡的 线虫 表示 高效 辐照 观察 后续的 代 到 分离 纯合的 整合的 转基因的 线条。 在 的 示例 方案 我们 将 整合 a 高 透射 速率 染色体外 阵列 携带 a 荧光的 共注射 标记物 表达 在 的 咽部

- 评估 的 透射 速率 的 的 转基因 线 到 是 整合的 对于 每个 转基因的 线 挑选 10 荧光的 怀卵的 成虫 到……上 10 分离 培养 培养皿 下 a 荧光的 体视显微镜 培养 的 动物 在 a 蠕虫 培养箱 设置 在 a 温度 允许的 到 繁殖 的 的 遗传学 背景

监测 的 子代 每个 天 到 评估 哪个 发育的 阶段 的 共注射 标记物 是 表达 和 能 是 最佳 观察到。 使用 荧光的 立体视觉 评估 的 透射 速率 的 的 子代 由 确定 的 百分比 的 荧光的 子代 对于 的 转基因 整合 选择 的 转基因的 线 与 的 最高 透射 速率

获取 a 种群 的 转基因的 动物 同步的 在 的 L4 幼虫 阶段 用于 整合 挑选 30 荧光的 妊娠的 成虫 到……上 五 培养 平板 之后 的 线虫 有 产卵 卵 用于 三 到 四 小时 在 15 度 摄氏度 检查 用于 的 存在 的 在 最少 30 卵 由 培养皿， 和 然后， 消除 的 成虫 从 的 板

培养 的 动物 在 a 蠕虫 培养箱 直到 的 子代 达到 的 L4 幼虫 阶段 放置 每个 培养皿 含有 15 到 20 荧光的 转基因 L4 动物 在 a UV 交联剂 与 的 盖子 已移除。 照射 的 线虫。

对于 恢复 孵育 的 辐照的 线虫 过夜 在 15 度 摄氏度 检查 用于 的 数量 的 动物 那 是 存活的 在 我们的 手 a 存活率 速率 的 左右 80% 到 90% 是 自适应 用于 一个 高效 辐照 培养 的 辐照的 动物 在 15 到 25 度 摄氏度 直到 的 子代 有 达到 的 发育的 阶段 允许 用于 的 观察 的 的 共注射 标记物 表达