靶向肝脏消融：利用甲硝唑在转基因斑马鱼幼虫中诱导肝细胞死亡

- 溶解 甲硝唑 在 卵 水 含有 DMSO a 溶剂， 和 添加 苯硫脲 哪个 防止 色素 形成 在 胚胎 转移 a 少数 幼虫 的 的 适当的 年龄 到 治疗 和 对照 平板 接下来， 添加 的 期望的 浓度 的 的 甲硝唑 溶液 到 的 测试 培养皿 和 卵 水 含有 DMSO 到 的 对照 平板

让 两 幼虫 培养皿中的 两 个 培养皿 内的 在 28 摄氏度 下继续生长。 转基因 转 幼虫 仅在 肝细胞中产生硝基还原酶 仅 在 肝细胞中 该酶 将 甲硝唑 甲硝唑 转化为 一 种细胞毒性药物 药物 导致 仅 靶向的 死亡 的 仅 的 靶向 肝细胞死亡。 处理后 后 移除 从 甲硝唑 溶液 从 的 处理 培养皿 中 并用 胚胎 胚胎 用 卵 水清洗。

添加 三卡因 到 麻醉 的 幼虫 和 检查 它们 下 一个 落射荧光 显微镜 用于 严重 肝细胞 消融-- 的 破坏 的 肝脏 细胞 你 将 观察 a 大量 较小 肝脏 在 处理的 个体 比 在 对照 组 个体 在 的 示例 方案 我们 将 使用 甲硝唑 用于 肝细胞 消融 在 转基因 斑马鱼 幼虫 到 研究 肝脏 再生

- 转移 向上 到 100 胚胎 进入 a 100 毫米 佩特里 培养皿 含有 25 毫升 的 卵水 和 位置 的 培养皿 在 28 度 摄氏度 为了 抑制 色素沉着 添加 PTU 到 的 培养 向上 到 10 小时 受精后 在 80 小时 术后 受精 麻醉 的 幼虫 与 三卡因 和 使用 落射荧光 显微镜 到 收集 的 CFP 阳性 幼虫， 保持 仅 的 动物 与 同样地 大小 肝脏

然后 替换 的 三卡因 卵 水 与 新鲜鸡蛋 水 补充 与 PTU 和 返回 的 CFP 阳性 斑马鱼 幼虫 到 的 28 度 摄氏度 培养箱 为了 处理 的 斑马鱼 幼虫 与 甲硝唑， 首先， 分割 的 适当的 数量 的 幼虫 进入 二 不同 培养 血管 保持 的 实验的 幼虫 组 在 a 溶液 的 新鲜的 制备 MTZ 和 的 对照 组 在 卵 水 补充 与 DMSO

封面 的 实验的 组 与 铝 箔 到 防止 照片 灭活 的 的 MTZ 和 孵育 两者 组 的 斑马鱼 幼虫 在 28 度 摄氏度 在 的 结束 的 的 消融 周期， 移除 的 MTZ 溶液 从 的 平板 和 洗涤 的 MTZ处理的 幼虫 二 到 三 次 与 25 毫升 的 卵水 和 涡旋混合， 丢弃 的 卵 水 之后 每个 洗涤。 之后 的 最后 洗涤， 固定 的 幼虫 与 一半 的 浓度 的 三卡因 此前 使用 到 避免 心脏 水肿 和 死亡 在 的 MTZ处理的 幼虫 然后 使用 的 CFP 过滤器 开启 一个 落射荧光 显微镜 到 评估 的 肝细胞 消融 水平 基于 在 的 相对的 肝脏 大小 的 的 MTZ处理的 幼虫 考虑 的 斑马鱼 与 大 肝脏 代表 0% 至 5% 的 的 幼虫 到 是 未消融的， 那些 与 培养基 大小 肝脏 代表 10% 到 20% 的 的 幼虫 到 是 部分地 消融的， 和 那些 与 非常 小 肝脏 代表 80% 到 90% 的 的 幼虫 到 是 完全 消融。