交配和卵子分期:一种按发育阶段生成胚胎和分拣胚胎的方法

0 views • 2:52 min • April 30th, 2023

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- 从配对水箱开始,这个水箱带有可拆卸的插入物,可以让鸡蛋掉下来。在胚胎收集前的晚上,将两条雄性和三条雌性成年鱼加入一个分开的交配池中,以在一夜之间相互适应。

第二天早上,将鱼转移到装有系统水的新交配池中,并取下隔板。等待 15 到 30 分钟,让鱼有时间交配和产卵。

现在收集胚胎并将它们储存在含有 Hank 胚胎培养基的培养皿中。在整个协议中,在 28.5 摄氏度下种植它们。在解剖显微镜下检查胚胎的形态。

您将观察到几个发展特征。胚盘的裂解产生多个细胞。胚层在卵黄细胞上方呈倒杯状。近轴中胚层节段在胚胎的背侧发育,依此类推。

受精后 24 小时后,只需按全身长度对胚胎进行分类即可。在示例协议中,我们将设置转基因 mCherry 报告鱼的交配并对所得胚胎进行排序。

- 首先,将胚胎培养到三个月大,即生殖成熟。在胚胎收集前一天晚上,将两条成年雄鱼和三条雌鱼从所需品系中分离到分开的新鲜系统水交配池中。第二天早上灯亮后,取下隔板,让鱼自然交配,直到在鱼缸底部观察到胚胎。

每隔 30 分钟收集一次胚胎,并将胚胎培养基的培养皿分开,直到收集到所需数量。为了对胚胎进行分期,每 50 厘米培养皿中以 75 至 10 个为一组培养它们,以促进所有胚胎的一致发育时间。然后将板保持在 28.5 摄氏度。

分割后至受精后约 24 小时使用 体节数 (HPF) 测量胚胎年龄,并根据发育年龄分离胚胎。

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Last updated: 11 July 2026