光片显微镜样品制备：活体斑马鱼胚胎的长期成像固定方法

- 首先， 准备 琼脂糖 由 添加 E3 培养基 哪一个 耗材 钙 到 的 去卵膜的 胚胎 到 熔融的 琼脂糖 接下来， 添加 MS222 到 麻醉 胚胎 冷却 的 琼脂糖 混合 到 38 度 摄氏度 关闭 到 凝固。 选择 a 少数 去卵膜的 胚胎 表达 荧光的 蛋白质 和 转移 它们 进入 的 琼脂糖 混合。

接下来， 完全 插入 a 活塞杆 进入 a 玻璃 毛细管 和 绘制 向上 一 胚胎， 制作 当然 那 它 进入 头部 首先。 一旦 的 琼脂糖 凝固， 使用 胶带 到 保持 的 毛细管 直立的 在 a 烧杯 含有 E3 培养基 的 开放 毛细管 底部 促进 气体 交换 用于 的 胚胎 样品

放置 的 毛细管 在 的 样本 支架 的 a 光 片 荧光 显微镜 这 激光 形成 a 薄的 光 片 允许 a 检测 目的-- 定位 垂直的 到 的 样本-- 到 捕获 a 横断面 图像。 在 的 示例 方案 我们 将 安装 斑马鱼 胚胎 到 图像 的 开发中 眼睛

开始 与 准备 的 琼脂糖 熔化 制备 1 毫升 等分试样 的 1% 低 熔化 点 琼脂糖 在 E3 培养基 在 70 度 摄氏度 之后 关于 15 分钟， 转移 600 微升 的 熔融的 琼脂糖 进入 a 新鲜的， 1.5 毫升 管 和 添加 250 微升 的 E3 培养基 50 微升 的 0.4% MS222, 和 25 微升 的 涡旋振荡 荧光的 珠粒 储备液 溶液

放置 的 管 在 a 加热 阻断 在 关于 39 度 摄氏度 到 让 的 琼脂糖 方法 其 凝胶化 点 接下来， 推 聚四氟乙烯尖端 活塞杆 向下 到 的 底部 的 1 毫米 内层 直径 玻璃 毛细血管 准备 五 的 这些。

现在， 简要地 涡旋混合 的 琼脂糖 混合物 和 然后， 转移 五 胚胎 与 a 最小的 量 的 液体 进入 它。 然后， 插入 a 毛细管 和 吸出 一 胚胎 头部 首先。

这 头部 必须 进入 之前 的 尾部 和 那里 不能 是 任何 空气 气泡。 绘制 向上 足够 溶液 因此 那里 是 关于 二 厘米 的 琼脂糖 上方 的 胚胎 和 1 厘米 的 琼脂糖 下方 它。

绘制 一 胚胎 进入 每个 毛细管 之前 继续进行。 此 步骤 需要 一些 练习 到 大师 准备 用于 它 使用 非贵重的 胚胎

当 的 琼脂糖 凝固 完全地， 储存 的 样本 在 E3 培养基 由 支持 的 毛细血管 到 a 烧杯 壁 与 塑性黏土 与 的 底部 开启 在 溶液 现在， 组装 的 样本 支架 首先， 插入 二 塑料 袖子 的 的 右侧 大小 对抗 每个 其他 进入 的 茎

该 裂隙 在 的 袖套 必须 面部 向外。 接下来， 连接 a 夹钳 螺钉 和 插入 的 毛细管 通过 的 支架 直到 的 黑色 颜色 条带 变为 可见的 在 的 其他 侧 避免 接触 的 活塞

然后， 拧紧 的 夹钳 螺丝 接下来， 推 a 厘米 的 琼脂糖 出 从 的 毛细管 和 修剪 它 关闭。 然后， 插入 的 茎 进入 的 样本 支架 圆盘

之前 加载中 的 样本 圆盘 检查 那 的 载物台 是 在 的 最上部 位置 在 的 对照 软件 然后， 使用 引导 轨道 到 滑行 的 支架 和 样本 向下 进入 的 显微镜 现在， 图像 的 选定 样本 作为 描述 在 的 text 实验方案