肌肉注射（IM）：向成年斑马鱼背肌递送化合物

- 转移 a 三卡因 麻醉的 鱼 到……上 a 湿润 海绵 与 的 背侧 侧面 面对 上 放置 的 海绵 携带 的 鱼 下 a 显微镜 位置 a 显微注射 针 在 a 45 度 角度 从 的 身体 轴 接近 的 背侧 肌肉

接下来， 定位 的 斑点 在 前部 的 的 背侧 fin 那 是 不 覆盖 与 量表 其中 你 能 插入 的 针 无 应用 很好 力 然后 轻柔地 插入 的 针 和 缓慢地 注射 的 化合物 的 兴趣 沿 与 a 标记物 如此 作为 苯酚 红色 进入 的 肌肉

如果 的 化合物 的 兴趣 包含 遗传学 材料， 电穿孔 的 细胞 由 放置 电极 在 或者 侧面 的 的 注射 位点 和 给药 的 电流 的 电流 使得 的 肌肉 细胞 可渗透的 和 能够 至 高效地 取 向上 的 遗传学 材料。 之后 的 步骤, 立即 转移 的 鱼 进入 a 恢复 罐 在 的 随后 方案， 我们 将 执行 一个 肌内 注射 开启 一个 成年 斑马鱼 到 递送 a DNA 疫苗 对抗 分枝杆菌病

至 保持 的 鱼 在 a 固定的 位置 在……期间 注射， 使用 a 块 的 海绵 与 a 沟槽 切割 在 的 中段 作为 缓冲 浸泡 的 海绵 彻底地 在 系统 水 和 设置 它 在 a 佩特里 培养皿 使用 a 塑料 勺子， 转移 一个 麻醉的 斑马鱼 到 的 湿润 海绵 与 的 鱼的 腹侧 侧面 向下 在 的 沟槽 下 的 显微镜, 位置 的 针 在 a 45 度 角度 关闭 至 的 斑马鱼的 背侧 肌肉 然后 找到 的 小 斑点 无 鳞片 在 前部 的 的 背侧 fin 和 推 的 针 进入 的 肌肉

如果 任何 电阻 是 毡 尝试 一个 相邻的 斑点 使用 a 足 切换 到 逐渐地 注射 的 质粒 溶液 进入 的 肌肉 下 的 显微镜, 的 苯酚 红色 应该 是 可见的 作为 它 进入 的 肌肉 组织。

注射后立即对鱼进行电穿孔 将 镊子型电极 放置在 注射部位两侧 处 通过 放置 该 镊子 型 电极 在 每一 侧 的 注射 位点 处 按下电穿孔仪上的“开始”按钮 该 开始 按钮 在 该 电穿孔仪 并施加六次 给予 它 六 40 伏 50 毫秒 脉冲 然后 轻柔地 转移 该 鱼 至 一个 恢复 水箱 最后 在 麻醉 该 鱼 之后 根据 该 文本 方案 使用 一个 UV 光源 来 观察 EGFP 表达 在 该 注射 位点附近