心脏解剖：一种观察斑马鱼心脏发育的方法

- A 斑马鱼 心脏 包含 四 腔室， 窦 venosus, 心房 心室， 和 球状的 动脉硬化。 它 是 位于 前方 在 的 腹侧 侧面 之间 的 鳃盖 和 的 胸肌 带 a 部分 的 的 骨骼的 系统 那 支持 的 胸肌 结束。 至 解剖 的 心脏， 位置 a 安乐死处死 固定的 鱼 进入 a 佩特里 培养皿 含有 磷酸盐缓冲 生理盐水 至 维持 a 恒定的 pH 的 的 鱼 组织 和 调整方向 腹侧 侧面 上

用镊子夹住鱼头 的 鱼 头 部 镊子 位于 两 眼 之 间及鳃部。 使用显微剪刀 沿 鳃部 横向剪开 穿过 前 腹部 再 沿 前 腹 部 然 后 垂直剪开 将 前 两 处切口连接起来。 用 一 把 尖头镊子 取下 胸 鳍 以 及 其 下方的 胸 带骨 以 暴露 银 色 心包膜 即 包 裹 心 脏 的膜。 用镊子 将 心包膜 移除 镊子 以 使 心 脏 清晰可见。 然后 剪断 与 动脉球 相连的 动 脉 膨 大部。

接下来， 位置 镊子 下 的 心房 和 舀取 的 心脏 出 的 的 身体 腔 握住 的 心脏 与 的 镊子 和 使用 另一个 镊子 到 移除 不需要的 组织 呈现 外部 的 心脏 在 的 随后 实验方案， 我们 将 解剖 的 心脏 从 不同 大小 鱼 到 图像 它的 发育 超过 的 鱼的 生命 跨度。

- 分配 每个 鱼 a 数字-字母 组合 到 允许 一个 个体 鱼 和 的 导致 解剖分离的 心脏 到 是 追踪的 用于 之后 分析。 输入 全部 数据, 包括 全部 测量， 进入 a 电子表格 和 组织 基于 开启 这些 标签 之前 解剖 标签 PCR 管 条带 与 指定 追踪 数量 和 填充 管子 与 PBT 或 其他 溶液 适当的 用于 进一步 分析。 定向 的 鱼 腹侧 侧面 向上 在 a 佩特里 培养皿 而 稳定化 的 身体 与 镊子 持握 的 头部 之间 的 眼睛 和 鳃 对于 鱼 较短 比 12 毫米 在 标准 长度, 使用 锋利的 镊子 或 a 微针 在 a 针持， 移除 的 胸肌 肌肉 和 鳍 来自 的 身体 到 揭示 的 心脏

- 的 恒定的 运动 的 的 镊子 在……期间 解剖 能 导致 电流 在 的 PBT 那 移动 的 鱼 这 是 尤其 有问题的 用于 较小 鱼 此， 的 微针 需求 到 是 使用 到 移除 胸肌 肌肉 和 fin 和 开放 的 身体 腔

- 使用 的 镊子 至 轻柔地 舀取 的 心脏 out 的 的 腔 来自 下 的 心房 如果 的 鱼 含有 a 荧光的 心脏 标记物， 使用 a 荧光的 显微镜 用于 的 解剖 和 验证 去除 的 的 心脏 由 荧光 一旦 的 心脏 是 已移除 从 的 腔 使用 的 镊子 到 保持 的 心脏 和 a 微针 至 移除 额外 非心脏的 组织 和 的 心外膜 内衬 从 的 外部 的 的 心脏

对于 鱼 更长 比 12 毫米 在 标准 长度 使用 弹簧手柄 显微剪 制作 三 切口 首先， 制作 a 横断面 切割 通过 的 鳃 第二， 制备 另一个 横断面 切割 在 的 前部 腹部 以及 第三， 制备 a 矢状 切割 在 的 腹侧 侧面 连接 两者 横断的 切口。 使用 锋利的 镊子 移除 的 胸肌 肌肉 和 鳍 从 的 身体 到 开放 的 身体 腔 和 揭示 的 银白色 组织 的 的 心包膜

移除 这 心包 组织 并且 的 心脏 将 成为 可见。 使用 的 微型剪刀 到 切割 的 动脉 连接的 到 的 球状的 动脉硬化 位于 更优的 至 的 心脏 一旦 这 动脉 是 切割， 位置 的 提示 的 的 镊子 下 的 心房 和 使用 的 镊子 到 舀取 的 心脏 出 的 的 腔 如果 那里 是 额外 组织 那 来 与 的 心脏， 那 是 精细， 作为 它 能 是 已移除 稍后。 或者， 在 一些 鱼类 它 是 可能的 到 移除 的 心脏 由 轻柔地 拉取 的 球状的 出 和 的 休息 的 的 心脏 将 请继续。

- 是 谨慎 的 的 位置 的 的 心房 如果 使用 的 替代的 技术, 作为 它 能 轻松地 是 受损。 如果 有 额外 组织 那 来 与 的 心脏， 这个 是 精细 和 能 是 已清除 之后。

- 一旦 的 心脏 是 已移除 来自 的 腔 使用 的 二 镊子 到 保持 的 心脏 和 移除 的 额外 组织 或 一 配对 的 镊子 到 保持 的 心脏 和 a 微针 至 移除 额外 非心脏的 组织