转导标记PDX肿瘤细胞：体外将表达荧光标记的慢病毒导入肿瘤细胞

慢病毒是一种含有RNA遗传物质的逆转录病毒。该病毒可高效且稳定地将外源基因导入癌细胞系。首先，将神经氨酸酶加入含有表达绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒的离心管中。将离心管置于37°C条件下孵育1小时，以提高病毒的结合效率。

接下来，离心含有肿瘤细胞悬液的离心管以形成细胞沉淀。加入含有polybrene的乳腺球培养基重悬细胞。polybrene是一种阳离子聚合物，可提高慢病毒的感染效率。随后，将适量的肿瘤细胞接种至6孔组织培养板中，每孔接种最适数量的细胞。向培养板的每个孔中加入所需量的慢病毒。

轻轻混匀培养板中的内容物，并在持续供应二氧化碳的条件下于37摄氏度孵育96小时。慢病毒进入细胞并释放RNA。病毒的逆转录酶将RNA转化为双链DNA，后者整合到宿主基因组中。将培养板置于荧光显微镜下，观察细胞是否成功转导。转导成功的细胞因表达GFP而发出荧光。

在本示例方案中，我们将使用慢病毒载体对PDX解离的肿瘤细胞进行转导。

为了转导肿瘤细胞，将分离的细胞以2毫升乳腺球培养基重悬后离心。计数后，再次离心细胞，并将细胞沉淀重悬于2毫升乳腺球培养基中，其中添加20微升聚凝胺。随后，将每孔2×10⁵个活肿瘤细胞接种至超低黏附6孔组织培养板中，并以感染复数（MOI）为10的慢病毒颗粒感染细胞。

轻轻晃动培养板，使病毒与细胞充分混合，将共培养物置于37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育，最长孵育96小时，并在前24小时后添加500微升新鲜的乳腺球培养基。当至少10%的细胞呈GFP阳性时，将至少一个孔中转导的细胞转移至预冷的15毫升锥形管中，并用1毫升乳腺球培养基洗涤该孔。

将洗涤液与细胞合并，加入10毫升含HEPES的HBSS缓冲液，离心分离肿瘤细胞。最后，将细胞重悬于50微升冰上预冷的基底膜基质提取物中，并将包埋的细胞转移至0.5毫升胰岛素注射器中，用于重新移植。