共培养乳腺癌细胞：将乳腺癌细胞与骨碎片共培养以研究癌细胞增殖

首先，将骨蜡块分别放入两个标记为实验组和对照组的细胞培养皿中。在每个培养皿的中央加入适量表达生物发光的乳腺癌细胞，孵育一定时间以促进细胞贴壁。在实验组培养皿的骨蜡上放置一小块骨组织，并通过施加压力将其固定。

缓慢地将含有胎牛血清（一种生长补充剂）的细胞培养基沿每个培养板的侧边加入，以浸没组织块，并在37°C条件下孵育特定时间。实验板中的骨组织会释放可溶性因子（如细胞因子和SRC激酶），这些因子可吸引乳腺癌细胞，导致其发生迁移。向每个培养板中加入底物，并将培养板置于生物发光成像室中。

表达生物发光蛋白的癌细胞氧化底物并发出光。通过软件测量每个细胞发射的总光子数来定量增殖情况。测试孔中的癌细胞应比对照孔中的细胞增殖更快。在以下实验方案中，我们将乳腺癌细胞与股骨骨外植体相邻共培养，以测量乳腺细胞的增殖。

本实验中，用含 10% FBS 的 DMEM 制备每 50 微升含 100,000 个细胞的乳腺癌细胞悬液。此外，准备骨蜡小块用于固定骨碎片。使用剪断的微量移液器吸头末端，在培养皿中储存骨蜡小块。然后用镊子将小块转移至六孔板中，并借助无菌手套将其压入 12 点钟位置。

接下来，将50微升细胞悬液移液至每个孔的中央。将培养板放入组织培养孵育箱中孵育45分钟，以促进细胞贴壁。在孵育期间，提取骨组织碎片。待细胞贴附后，将骨组织碎片放置于3个孔中的骨蜡上，并使用持骨钳逐个压紧。另设3个不含骨碎片的孔作为对照。

接下来，沿每个孔的孔壁缓慢加入5毫升含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基，注意不得使骨蜡和骨碎片移位。随后将培养物在培养箱中孵育20至24小时。次日对细胞进行成像：首先向每孔加入300微克/毫升的荧光素（luciferin），然后立即使用IVIS成像系统对培养板进行成像。