器官条件培养基：利用收获的器官细胞制备培养基用于转移性癌症研究

某些器官会产生可溶性因子，并成为乳腺癌转移的优先部位。利用这些收获的器官细胞制备的条件培养基可能有助于鉴定和研究此类因子。

首先将获取的器官（如肝脏）放入含有冷 PBS 的试管中，通过上下翻转试管以去除器官残留的血液。将器官置于培养皿中，使用解剖刀将器官切成小块。

将这些组织块重悬于含有基础培养基的离心管中，培养基中需添加抗生素以支持细胞生长并防止污染。随后，将细胞悬液倒入培养皿中，在37摄氏度、持续供应二氧化碳的条件下孵育所需时间。

孵育过程中，这些细胞会向培养基中释放代谢物、生长因子和细胞外基质蛋白。随后，将细胞悬液转移至离心管中，并加入新鲜培养基进行稀释。离心后，将上清液（即条件培养基）过滤至新的离心管中。

在以下实验方案中，我们将制备来自小鼠肺脏和脑组织的条件培养基，以研究乳腺癌细胞的转移行为。

为制备肺组织条件培养基，将肺组织管倒置三次，以去除器官中残留的血液。随后用新鲜的冷 PBS 取代洗涤液，并重复此步骤，直至盐水溶液中无血液残留。

随后，将肺组织转移至每只小鼠一个 60 平方毫米的玻璃培养皿中，并使用两把无菌手术刀片通过反复来回切割将组织切碎。

当组织碎片大小约为1立方毫米时，将组织碎片重悬于适量添加了抗生素的DMEM/F-12培养基中，并于37摄氏度、5% CO2条件下，每只小鼠接种至6孔板的一个孔中进行培养。

24 小时后，将每个孔中的全部内容转移至各自的 50 毫升锥形管中，并用三倍体积的新鲜 DMEM/F-12 培养基稀释每管中的条件培养基。

离心试管以去除任何较大的组织碎片。然后将条件培养基通过0.22微米注射器滤器收集到一个50毫升的锥形管中。