अंग वातानुकूलित माध्यम: मेटास्टेटिक कैंसर अध्ययन के लिए काटा अंग कोशिकाओं से मध्यम उत्पादन

कुछ अंग घुलनशील कारकों का उत्पादन करते हैं और स्तन कैंसर मेटास्टेसिस के लिए तरजीही साइट बन जाते हैं। इन काटे गए अंगों की कोशिकाओं से तैयार एक वातानुकूलित माध्यम ऐसे कारकों की पहचान करने और उनका अध्ययन करने में मदद कर सकता है।

एक काटे गए अंग जैसे ठंडे पीबीएस युक्त ट्यूब में जिगर रखकर शुरू करें और अंग के अवशिष्ट रक्त को हटाने के लिए ट्यूब को ऊपर और नीचे फ्लिप करके। अंग को पेट्री डिश में रखें। और एक स्केलपेल का उपयोग करके, अंग को छोटे टुकड़ों में पासा करें।

सेल विकास का समर्थन करने और संदूषण को रोकने के लिए एंटीबायोटिक के साथ पूरक बेसल माध्यम युक्त ट्यूब में इन टुकड़ों को फिर से खर्च करें। अब, सेल निलंबन को एक संस्कृति प्लेट में डालें और आवश्यक अवधि के लिए निरंतर कार्बन डाइऑक्साइड की आपूर्ति के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।

इनक्यूबेशन के दौरान, ये कोशिकाएं मेटाबोलाइट्स, विकास कारक, एक्सपेरिमेंटल मैट्रिक्स प्रोटीन को माध्यम में छोड़ती हैं। इसके बाद, सेल सस्पेंशन को सेंट्रलाइज ट्यूब में ट्रांसफर करें और इसे पतला करने के लिए फ्रेश मीडियम डालें । ट्यूब को सेंट्रलाइज करें और सुपरनेट को फ़िल्टर करें, जो वातानुकूलित माध्यम है, एक ताजा ट्यूब में।

निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम स्तन कैंसर की कोशिकाओं के मेटास्टैटिक व्यवहार का अध्ययन करने के लिए माउस फेफड़ों और मस्तिष्क से वातानुकूलित मीडिया तैयार करेंगे।

फेफड़ों के वातानुकूलित माध्यम को उत्पन्न करने के लिए, अंगों से किसी भी अवशिष्ट रक्त को हटाने के लिए फेफड़ों के ऊतकों की ट्यूबों को तीन बार उलटा करें। फिर ताजा ठंड पीबीएस के साथ धोने की जगह और जब तक खारा रक्त मुक्त है दोहराने ।

इसके बाद, फेफड़ों को प्रति माउस 1 60 वर्ग मिलीमीटर ग्लास पेट्री डिश में स्थानांतरित करें और ऊतकों को दोहराए जाने वाले आगे और पीछे टुकड़ा करने के साथ कीमा बनाने के लिए दो बाँझ स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करें।

जब ऊतक के टुकड़े आकार में लगभग 1 मिलीमीटर क्यूब होते हैं, तो डीएमईएम/एफ-12 माध्यम की उचित मात्रा में टुकड़ों को एंटीबायोटिक दवाओं के साथ पूरक किया जाता है और ऊतकों को 37 डिग्री सेल्सियस और 5% CO2 पर 6-अच्छी तरह से प्लेट प्रति माउस के एक कुएं में उगाएं।

24 घंटे के बाद, प्रत्येक अच्छी तरह से पूरी सामग्री को व्यक्तिगत 50 मिलीलीटर शंकु ट्यूबों में स्थानांतरित करें और वातानुकूलित मीडिया को ताजा डीएमईएम/एफ-12 माध्यम प्रति ट्यूब के तीन समकक्ष संस्करणों के साथ पतला करें।

ऊतक मलबे के किसी भी बड़े टुकड़े को हटाने के लिए ट्यूबों को सेंट्रलाइज करें। फिर एक 50 मिलीलीटर शंकु नली में एक 0.22 माइक्रोन सिरिंज छलनी के माध्यम से वातानुकूलित मीडिया पूल।