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斑马鱼胚胎异种移植物可用于研究癌细胞侵袭。通过将荧光标记的转移性癌细胞和非癌细胞注射到两个转基因胚胎的卵黄周围间隙来制备异种移植模型。卵周间隙是胚胎周皮和卵黄囊之间的空间。让胚胎生长所需的时期。
在此期间,转移性癌细胞在注射部位积极分裂,而非癌细胞保持稳定。孵育后,使用巴斯德移液管将胚胎转移到玻璃底悬浮皿中。去除多余的蛋水,将胚胎放置在所需的成像位置。将盖玻片放在培养皿的顶部,并将培养皿置于明场显微镜下。
捕获图像并分析两种细胞的侵袭行为。转移性癌细胞倾向于从注射部位侵入血管。它们沿着循环移动,然后侵入周围组织进行增殖。相比之下,非癌细胞保留在注射部位。在示例方案中,我们将在斑马鱼异种移植模型中将乳腺癌细胞注射到 Cuvier 的卵周间隙和导管中以研究转移。
为了观察转移,用巴斯德移液管将注射的斑马鱼胚胎转移到玻璃底聚苯乙烯培养皿中,并去除多余的蛋水。使用设置为低放大倍率的共聚焦显微镜对胚胎的整个身体进行成像,以获得肿瘤细胞播散的一般模式。
使用 488 纳米激光观察斑马鱼胚胎脉管系统,使用 543 纳米激光观察用红色荧光标记标记的植入肿瘤细胞。接下来,分 8 到 10 个步骤扫描胚胎以获得高质量的图像。