去细胞化乳腺脂肪垫：从乳腺脂肪垫中提取细胞外基质水凝胶

首先，将乳腺脂肪垫（MFPs）置于含有胰蛋白酶-EDTA溶液的培养皿中，孵育所需时间以破坏细胞基质黏附。用去离子水清洗MFPs，并通过滤网过滤。将组织放入带有搅拌子的烧杯中，加入Triton X-100。搅拌以裂解细胞，同时不影响组织细胞外基质中的生长因子。

过滤MFPs并用去离子水冲洗。将组织转移回烧杯中，加入脱氧胆酸以裂解残留细胞。接着再次过滤MFPs，并将其置于含有含青霉素-链霉素的去离子水的烧杯中，以防止污染。将烧杯在4摄氏度下孵育过夜。

将MFPs进行过滤，并将其放入含有乙醇和过氧乙酸的烧杯中。过氧乙酸可增加组织细胞外基质的刚性。搅拌一段时间后，重复过滤步骤。用PBS洗涤MFPs，随后用去离子水洗涤。将过滤后的MFPs转移至含有1-丙醇的烧杯中。

搅拌一段时间，过滤内容物，并用去离子水清洗 MFPs。将 MFPs 干燥后于零下 80 摄氏度保存。在以下方案中，我们将对小鼠乳腺脂肪垫进行脱细胞处理。

首先，将MFPs放入六厘米培养皿中，并加入五毫升胰蛋白酶-EDTA溶液。用70%乙醇喷洒并擦拭培养皿，于37摄氏度孵育一小时。使用0.7毫米滤网，通过将去离子水倾倒在组织上三次，清洗MFPs。每次清洗之间用镊子手动轻柔按摩组织。

接下来，用无尘纸短暂吸干组织并称重。将干燥的组织放入一个预先高压灭菌的烧杯中，烧杯内含有适当大小的搅拌子，然后按每克组织加入60毫升3%的t-辛基苯基聚乙二醇醚（t-octylphenoxy polyethoxyethanol）覆盖组织。室温下搅拌一小时。随后，将烧杯中的内容物倒入滤筛中。

用去离子水冲洗烧杯，并将冲洗液倒入组织中。重复此冲洗过程两次，确保每次冲洗之间使用镊子手动按摩组织。之后，将组织在一张精细擦拭纸上短暂干燥并称重。将组织和搅拌子放回相同的烧杯中，并按每克组织加入60毫升4%脱氧胆酸覆盖。室温下搅拌一小时。

接下来，将烧杯中的内容物倒入网筛中。用去离子水冲洗烧杯，并将冲洗液倒在组织上。重复此冲洗过程两次，确保每次冲洗之间使用镊子手动揉搓组织。用精细擦拭纸将冲洗后的组织短暂吸干，并称重。

将干燥的组织放入同一烧杯中，加入含有1%青霉素-链霉素的新鲜去离子水。用封口膜 tightly 封住烧杯，并在4摄氏度下静置过夜。第二天，将烧杯中的内容物倒入滤网中沥干。用无尘纸轻轻擦干组织后称重。然后，将MFPs与适当大小的搅拌子一同放入同一烧杯中。

用每克组织含4%乙醇和0.1%过氧乙酸的溶液60毫升覆盖组织，室温下搅拌2小时。将烧杯中的内容物倒入0.7毫米的筛网中。用镊子手动揉搓组织，并将内容物重新放回烧杯中。用每克组织60毫升的1×PBS溶液覆盖组织，清洗组织。

室温下搅拌15分钟。将整个洗涤过程再重复一次。接下来，将烧杯中的内容物倒入一个0.7毫米的筛子中。使用镊子手动揉搓组织，然后将内容物重新放回烧杯中。按每克组织加入60毫升去离子水覆盖组织的方式洗涤组织。

室温下搅拌15分钟。将整个洗涤过程再重复一次。用无尘纸轻轻擦干洗涤后的组织并称重。将组织及内容物倒入滤网中，使用镊子手动按摩组织。将内容物重新放回烧杯中，并按每克组织加入60毫升100%正丙醇覆盖组织。

室温下搅拌一小时。然后用无尘纸轻轻吸干组织并称重。将组织及内容物倒入0.7毫米的筛网中，用镊子手动揉搓组织。将筛网中的内容物重新放回烧杯中，并按每克组织加入60毫升去离子水覆盖组织的方式清洗组织。

室温下搅拌15分钟。重复此洗涤过程三次。之后，将组织在无尘纸上短暂干燥并称重。将组织转移至已标记的15毫升离心管中，并于-80 °C冷冻过夜。