肺腺癌移植：一种将癌细胞植入小鼠肺部的方法

— 首先，在小鼠气管内注射博来霉素（bleomycin），这是一种非核糖体合成的杂合药物，于肿瘤细胞移植前数天给予，以诱导肺部纤维化。接着，在组织培养基中培养肺癌细胞系。用PBS稀释细胞，制备癌细胞悬液。通过腹腔注射氯胺酮-赛拉嗪溶液，对预处理小鼠进行麻醉。

现在，将小鼠置于插管平台上，使其门齿悬挂于平台前方，背部紧贴平台。打开小鼠口腔并轻柔地拉出舌头。将导管插入气管，直至导管顶端到达门齿处，然后在气管内注入所需量的癌细胞悬液，以将生物发光癌细胞植入肺部。

等待小鼠吸入全部体积。轻柔地移除导管，并将小鼠放置于恢复垫上。数天后，通过眼眶后注射的方式交替向双眼注射荧光素，然后将小鼠置于成像仪中。

癌细胞表达荧光素酶，在氧气存在下可将荧光素转化为氧化荧光素并发出光。通过计算发光值来获取图像，以监测肺部的肿瘤负荷。在以下实验方案中，我们将进行肺腺癌细胞在小鼠体内的移植。

对于本实验方案，首先需向小鼠注射博来霉素。14 天后，再注射肿瘤细胞。两次注射的操作步骤非常相似，具体方法如下所述。

注射前两小时，将博来霉素储备液置于冰上解冻，并稀释至工作浓度，全程保持冰上保存。如需细胞团注射，请按照文本方案中所述准备好细胞悬液。每只小鼠的操作时间总计约10分钟。务必通过脚趾夹捏法确认麻醉效果，并在小鼠眼睛上涂抹兽用眼膏。

此时，如果小鼠毛发颜色较深，则需将其腹侧和背侧的整个肋骨区域毛发剃除，以便正确成像。然后将小鼠固定在气管插管平台上，使其门齿被固定，背部紧贴平台。如果需要注射细胞团，应立即用轻柔吹打的方式重新悬浮细胞。

现在照亮胸部上部区域，打开口腔，并使用平头镊子轻轻拉出舌头。通过移除针头准备用于气管的静脉导管，然后将其置于气管开口上方。接着，将导管插入气管，直至导管顶端接近门齿位置，并照亮导管内部以确认其位置是否正确。

然后将50微升新配制的博来霉素或细胞悬液直接注入导管中。等待数秒，使全部液体流经导管。随后取出导管，并将其丢弃于10%次氯酸钠溶液中。

— 如果小鼠未吸入液体，请仔细观察其呼吸情况并调整导管位置。若小鼠呼吸停止，应立即撤出导管，让小鼠恢复呼吸后再重新插入导管。

— 拔除导管后，继续进行操作，使五只经处理的小鼠仍处于麻醉状态并准备成像。对于恢复过程，将小鼠仰卧置于符合IACUC规定的加热垫上，并放入恢复笼中，监测直至其完全恢复。