肺癌细胞与癌相关成纤维细胞的三维共培养：一种用于研究肿瘤进展的体外模型系统

在三维共培养体系中，多种细胞类型共同生长于基底膜基质等模拟天然细胞外基质微环境的基质中，从而促进细胞间以及细胞与基质间的相互作用。为建立嵌入式三维共培养体系，需将癌相关成纤维细胞（CAFs）与肺癌细胞按2:1的比例混合，制备成均匀的细胞悬液，并将其悬浮于基底膜基质中。为防止基质在室温下发生凝固，操作过程中应将悬液置于冰上保存。

将适量的悬液转移至细胞培养板中。在37摄氏度下孵育所需时间，使细胞共同包埋于基质中。为建立覆盖式三维共培养体系，需将肺癌细胞重悬于基底膜基质中，调整至所需细胞密度，并将悬液置于冰上保存。用移液器将适量的细胞-基质悬液加入细胞培养板中。在37摄氏度下孵育，以建立包埋型癌细胞单层培养体系。

随后，将悬浮于优选培养基中的所需体积的CAFs转移至包埋的癌细胞上。在三维共培养体系中，CAFs可促进癌细胞球体的形成，并吸引癌细胞，从而形成泪滴状结构。在本方案中，我们将共培养TUM622肺癌细胞和CAFs，以研究它们之间的相互作用。

— 按照前述方法制备 TUM622 和 CAF 细胞悬液后，通过将 10 微升细胞悬液与 10 微升台盼蓝混合，计数 CAF 的细胞密度。取 10 微升混合液加入血细胞计数板的两个计数室，进行细胞计数并计算细胞密度。为将 TUM622 细胞与 CAF 共同包埋于基底膜基质中，首先根据细胞密度信息计算铺板所需的细胞数量，CAF 与 TUM622 细胞的接种比例为 2:1。将计算体积的 TUM622 细胞悬液和 CAF 细胞悬液转移至同一离心管中，离心后吸除全部培养基。用基底膜基质重悬细胞沉淀，并将 310 微升混合液接种至 24 孔板的每个孔中。如需进行免疫荧光染色，则按照前述方法将 60 微升 TUM622 与 CAF 的混合液转移至腔室载玻片中。

为了在基底膜基质中将TUM622与上层接种的CAFs进行共培养，首先按照前述方法建立TUM622单层培养。将两倍数量的CAF悬液转移至离心管中，在室温下以300 × g离心5分钟。吸除上清液，并将CAFs重悬于1 mL的3D培养基中。将1 mL CAF悬液转移至含有包埋TUM622细胞的孔中。