0 次观看 • 3:02 分钟 • April 30th, 2023
首先，向蛋白质样品中加入生物素溶液和标记缓冲液。孵育以促进生物素与蛋白质的结合。加入终止试剂并涡旋混匀。接下来，将抗体微阵列芯片放入含有封闭试剂的培养皿中，以防止抗体的非特异性结合。用双蒸水洗涤芯片以去除封闭液。将微阵列芯片放入杂交盒中。将生物素标记的蛋白质样品与偶联溶液混合后加至芯片上，以促进目标蛋白质与其对应的抗体结合。将芯片转移至含有洗涤缓冲液的培养皿中，并用双蒸水替换缓冲液。随后，将芯片放入含有荧光标记链霉亲和素的检测缓冲液中，以促进其与生物素化蛋白质的结合。
在避光条件下孵育培养皿，以维持荧光强度。取出载玻片并放入微阵列扫描仪中。扫描仪检测与目标蛋白结合的链霉亲和素所产生的荧光信号。根据荧光强度，软件分析蛋白表达水平的变化。在以下实验方案中，我们采用抗体微阵列技术分析与细胞周期相关的基因表达改变。
— 本实验旨在通过 microRNA 处理，检测细胞周期通路中所有蛋白质表达水平的变化。按照转染部分所述步骤收集蛋白样品，并使用 BCA 法进行定量。实验前一小时将载片从负 4 摄氏度冰箱中取出，恢复至室温以去除湿气。取 70 微克蛋白样品，根据制造商说明书制备样品载片，具体步骤也在文本部分逐步描述。
需要注意的是，使用超纯去离子水彻底清洗载玻片是另一个重要步骤，这有助于降低载玻片的背景信号。此外，在本实验中，至关重要的是在最终步骤之前切勿让样本载玻片干燥。最后，使用微阵列仪器扫描载玻片并分析数据。