抗体微阵列:一种研究 miRNA 处理的肺癌细胞蛋白表达的技术

0 views • 3:02 min • April 30th, 2023

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- 首先向蛋白质样品中加入生物素溶液和标记缓冲液。孵育以促进生物素附着在蛋白质上。添加终止试剂并涡旋。接下来,将抗体微阵列载玻片放入含有封闭试剂的培养皿中,以防止抗体的非特异性结合。用双蒸水清洗载玻片以去除阻塞溶液。将微阵列载玻片放入腔室中。将生物素化蛋白质样品与偶联溶液混合,并添加到载玻片上,以促进靶蛋白与其相应抗体的结合。将载玻片转移到含有洗涤缓冲液的培养皿中,并用双蒸水更换缓冲液。接下来,将玻片置于含有荧光标记的链霉亲和素的检测缓冲液中,以促进其与生物素化蛋白的结合。

在黑暗中孵育培养皿以保持荧光强度。取出载玻片并将其放入微阵列扫描仪中。扫描仪寻找来自与靶蛋白结合的链霉亲和素的荧光信号。根据荧光强度,该软件分析蛋白质表达的程度。在以下方案中,我们进行抗体微阵列分析与细胞周期相关的基因表达改变。

- 本实验旨在通过 microRNA 处理鉴定所有细胞周期通路蛋白的表达变化。根据转染部分中描述的程序收集蛋白质样品,并用 BCA 测定进行定量。实验前 1 小时将载玻片从零下 4 摄氏度中取出,使其达到室温并去除水分。取 70 微克蛋白质样品,根据制造商的说明准备样品载玻片,该说明也在文本部分逐步描述。

这里需要注意的是,用超纯去离子水正确清洗载玻片是另一个重要步骤,因为这将有助于减少载玻片的背景。此外,在本实验中,在最后一步之前不要使样品玻片干燥,这一点非常关键。最后,使用微阵列机扫描载玻片并分析数据。

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Last updated: 18 July 2026