斑马鱼异种移植实验：一种评估治疗药物在斑马鱼体内对肿瘤发生抑制效果的方法

— 首先，将卵放入培养皿中，并加入Danioeau溶液以维持新采集的卵。加入苯硫脲以抑制色素形成，孵育数天。孵育后，使用尖头镊子去除胚胎的卵膜，并让胚胎继续生长。

接下来，将所需数量的癌细胞接种于培养瓶中，过夜培养。然后加入抗癌化合物，继续培养。培养结束后，加入荧光细胞示踪染料，该染料将结合细胞膜并对细胞进行染色。

接下来，加入胰蛋白酶以进行细胞解离，并在操作前将细胞稀释于含酚红的PBS溶液中以评估pH值。将麻醉后的斑马鱼胚胎固定在琼脂平板上。随后将含有癌细胞悬液的微毛细管装样，并将其注射至胚胎的卵黄囊中。

将胚胎转移至含有 Danieau 溶液的培养皿中继续培养。随后，取少量胚胎置于玻璃载玻片上，加入甲基纤维素以固定胚胎。将载玻片置于荧光显微镜下，利用软件定量分析肿瘤大小。

抗癌化合物通常会抑制癌细胞形成肿瘤的能力。在以下实验方案中，我们将研究羟基香豆素联合BH3模拟物对斑马鱼体内肿瘤形成的影响。

— 按照文本方案接种A549细胞并用化合物处理后，在处理结束前24小时，加入4 µM荧光细胞示踪染料CM-Dil对细胞进行染色，并继续孵育2小时。

孵育结束后，使用0.05%胰蛋白酶EDTA消化细胞。然后在注射前将10的6次方个细胞稀释于50微升含酚红的PBS溶液中。为进行癌细胞显微注射，使用以下程序设置拉制1.0毫米玻璃毛细管。

使用注射器切割毛细管，以形成锋利的边缘。然后用20微升细胞酚红溶液填充微毛细管。根据文本方案麻醉斑马鱼后，通过3至5次注射，每次注入6至10纳升，共向卵黄囊内注射100至200个细胞。

－ 微注射操作应非常小心且精确，以确保注入准确的细胞体积，将注射损伤降至最低，同时二氧化碳压力应保持在最佳水平，以避免鱼类死亡。

注射后，将斑马鱼置于含有PTU的5毫升新鲜Danieau's溶液中恢复10至30分钟。将斑马鱼转移至24孔板中，每孔加入1毫升含PTU的Danieau's溶液，在28.5摄氏度条件下孵育72小时。孵育结束后，按照文本所述方案对斑马鱼进行麻醉，然后用一滴3%甲基纤维素将其固定在载玻片上。