免疫荧光检测法：一种用于鉴定捕获在医用导丝上的肿瘤细胞的方法

— 取一根功能化的导线，其一端有小段镀金部分，表面包被有结合了目标抗体的水凝胶。将导线的镀金部分浸入含有肿瘤细胞的小瓶中，用导线塞封闭后，在旋转管中孵育。表达表面抗原的循环肿瘤细胞（CTCs）会与导线上的抗体结合。随后将导线浸入含有磷酸盐缓冲液（PBS）的小瓶中进行清洗，并自然风干。接着将导线浸入丙酮溶液中，通过脱水作用固定细胞。

接下来，将导线轻轻插入一个P200吸头中，使导线的功能化部分位于吸头内部。用含有与荧光染料偶联的抗体的溶液浸润胶带，以完全浸没导线。这些标记的抗体会与细胞表面相应的抗原结合。用实验室封口膜密封开口，并在4摄氏度避光条件下孵育过夜。随后，用PBS洗涤导线，以去除未结合的抗体。将导线放入导线架中，在荧光显微镜下观察。与抗体结合的循环肿瘤细胞（CTCs）会在导线上发出荧光。在接下来的实验方案中，我们将利用医用导线捕获循环肿瘤细胞，并通过免疫荧光染色对其进行鉴定。

— 开始实验时，用 4 毫升完全培养基将一个处于 80% 融合度的 T75 培养瓶中的全部内容物重悬于一个 5 毫升小瓶中。接着，将导线从其玻璃包装中取出，将导线上修饰过的金质部分浸入小瓶中，确保导线的封堵部分与 5 毫升小瓶之间形成密闭的防水密封。用实验室封口膜密封导线，然后在室温下将导线置于旋转管架上孵育 30 分钟。旋转结束后，使用三个不同的洁净小瓶，用一倍浓度的 PBS 溶液将导线冲洗三次，并等待导线自然干燥。

在通风橱中将导线室温下晾干10分钟，然后将导线浸入5毫升管中的100%丙酮溶液中，室温下处理10分钟以固定细胞。确保功能化尖端无任何丙酮残留。将导线在室温下再晾干5分钟。接下来，在5毫升管中用一倍浓度的PBS溶液清洗导线两次。将导线置于抗体稀释缓冲液中孵育。

根据数据表中的说明，配制150微升抗体混合液，其中包含用荧光染料标记的单克隆一抗和抗体稀释缓冲液。然后使用P200枪头将导线从导线塞中抽出，并轻轻将导线穿过枪头较大的孔。先插入未修饰的一端，缓慢拉动导线使其穿过较小的孔，直至金涂层部分刚好超出较大的孔。轻柔地将150微升抗体混合液加入枪头中。

为避免产生气泡，轻轻旋转金属丝，直至其功能化末端完全浸入。封闭尖端的孔洞，并用实验室封口膜包裹该孔。将金属丝垂直置于4摄氏度黑暗环境中孵育过夜。第二天，用一倍浓度的PBS洗涤金属丝两次，以阻断抗体孵育。随后将金属丝重新插入其金属丝塞中。