miRNA 提取:一种从血浆样品中提取 miRNA 的方法

- MicroRNA 或 miRNA 是参与基因调控的非编码小 RNA。它们的表达在癌症过程中会发生变化，因此是潜在的癌症生物标志物。要开始 miRNA 分离，请取新鲜采集的全血样品并在 4 摄氏度下离心，以将血浆与血细胞分离。将上清液转移到新试管中，再次离心以获得更澄清的血浆上清液。提取上清液，用冷冻的均质溶液处理，然后用裂解缓冲液匀浆样品。添加蛋白酶 K 酶溶液以降解蛋白质，特别是核酸酶，否则这些核酸酶会在下游步骤中消化 RNA。

- 接下来，将裂解物加载到预组装的仪器专用核酸提取卡盒的指定孔中。将 DNase 1 溶液添加到适当的孔中，以去除样品中的基因组 DNA。在分离 miRNA 之前，将不含核酸酶的水添加到组装在柱上的洗脱管中进行调节。将卡盒组件加载到核酸提取仪中。选择并运行合适的 miRNA 纯化软件。完成后，取出含有 miRNA 的洗脱管并储存在零下 80 摄氏度。

- 在以下方案中，我们展示了从患者血液样本中提取 miRNA 以进行肺癌筛查。

- 要开始此方案，请使用 vacutainer 管收集 10 毫升全血样本。在室温下储存。

- 不要在低温（如 4 摄氏度）下储存全血，以避免热冲击和细胞裂解，从而导致非特异性 microRNA 释放。

- 在 1 小时内离心血浆以分离。在确保避免接触淋巴细胞环的同时，将上清液转移到 15 毫升试管中。然后在相同条件下离心上清液。 将 1 毫升血浆上清液分装到 1.5 毫米冷冻管中，小心避免从管底部收集血浆组分。要开始 RNA 分离，每个样品将 200 μL 预冷的 OMG 溶液添加到 200 μL 血浆中。为确保完全均质，涡旋 15 至 30 秒。要使样品均质化，每个样品添加 200 μL 裂解缓冲液和 25 μL 蛋白酶 K，并涡旋 20 秒。

- 然后将样品在 37 摄氏度下在热混合器中孵育 15 分钟。接下来，选择 RSC miRNA 组织方法，并将每个样品的卡盒加载到核酸自动提取器的甲板托盘上，正确放置柱塞。转移裂解物，并将 5 μL DNase 1 溶液添加到仪器卡盒中的适当位置。向每个洗脱管的底部添加 60 μL 不含核酸酶的水。要开始自动纯化，请开始运行。将总 RNA 样品储存在零下 80 摄氏度。