免疫组织化学染色:一种从薄组织切片中获取空间信息的方法

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- 首先将薄组织切片置于氨溶液中,以便进行温和的抗原修复。将切片转移到聚赖氨酸包被的载玻片上。带负电荷的细胞与带正电荷的聚赖氨酸结合。接下来,添加过氧化氢以阻断内源性过氧化物酶活性。在 Tris 缓冲盐水 TBS 中洗涤载玻片。

TBS 通过破坏蛋白质交联来促进抗体对抗原的获取。用封闭溶液洗涤切片以减少非特异性抗体结合。将一抗添加到切片中并孵育过夜。一抗与细胞表面存在的特异性抗原结合。用 TBS 清洗载玻片。

添加附着在一抗 Fc 区的生物素偶联二抗。用链霉亲和素-生物素过氧化物酶洗涤切片。接下来,将过氧化物酶的显色底物添加到组织中。过氧化物酶将色原转化为有色不溶产物。

用苏木精溶液对组织进行复染。苏木精与细胞的酸性成分结合并使它们变成蓝色。在光学显微镜下观察组织。由于苏木精,抗原被检测为红色,而细胞呈蓝色。在以下方案中,我们将进行免疫组织化学染色,以从支气管内活检中鉴定 CD45 和 CD1a 细胞。

- 在对嵌入的活检组织进行切片之前,小心地将刀架调整到活检块的角度,使刀片平放在活检块的表面。然后从每个支气管内活检样本中缓慢切下至少两个 2 微米厚的切片,使用镊子将每个新鲜切割的组织切片转移到 0.05% 氨水和蒸馏水溶液中。45 到 90 秒后,使用涂有聚-L-赖氨酸的显微镜载玻片拾取每个展开的切片,并让切片干燥至少一个小时。

当切片干燥后,根据实验对载玻片进行标记,并在每个样品周围绘制疏水屏障。接下来,将 1 毫升新鲜制备的过氧化物酶封闭溶液涂抹在切片上。30 分钟后,去除过氧化物酶封闭液,然后用 TBS 洗涤切片 3 次,每次 5 分钟,然后去除 TBS 并加入 1% BSA 封闭液再孵育 30 分钟,以阻断任何非特异性抗体结合。

孵育结束时,加入用 TBS 稀释的目标一抗,并盖上样品玻片,在室温下孵育过夜。第二天早上,在 TBS 中洗涤载玻片 3 次,并在室温下应用目标二抗 2 小时。孵育结束时,在新鲜 TBS 中再洗涤载玻片 3 次,并在室温下将样品在新鲜制备的链霉亲和素-生物素过氧化物酶复合物溶液中孵育 2 小时,然后再洗涤 3 次 TBS。

然后用新鲜制备的 AEC 过氧化物酶底物溶液处理培养皿 20 至 30 分钟。当达到所需的染色强度时,用流动的自来水冲洗玻片 5 分钟,然后用过滤的 Mayer 苏木精溶液对切片进行复染。2 分钟后,在流动的自来水中再清洗玻片 5 分钟,然后排空玻片并用永久性水性封片剂覆盖切片,在 80 摄氏度的干燥箱中干燥样品。

冷却后,用 DPX 封固剂和盖玻片封固样品,以便在光学显微镜上以 40 倍放大倍率进行分析。

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Last updated: 25 July 2026